NLRP3炎症体参与末端糖基化产物诱导的人主动脉内皮细胞损伤

目的 观察NLRP3炎症体在末端糖基化产物(AGEs)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)细胞损伤中的作用.方法 制备AGEs并以不同浓度AGEs处理体外培养的HAECs,再以抗氧化剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)处理细胞.MTT法评估细胞活性;流式细胞术测定细胞内活性氧簇(ROS)生成水平;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β水平;免疫印记法检测HAECs中NLRP3、ASC、caspase1 p20以及IL-1β 蛋白表达水平.结果 与正常对照相比,经不同浓度AGEs处理后的HAECs细胞活力显著下降(P<0.05);细胞内ROS生成水平显著增加(P<0.05);细胞内NLRP3、ASC、caspase-1 p20以及IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);细胞培养上清液内IL-1β水平显著升高(P<0.05).上述变化均具有AGEs浓度依赖性(P<0.05).抗氧化剂NAC处理能够显著改善AGEs对细胞活力的抑制(P<0.05),抑制ROS产生(P<0.05),下调NL-RP3、ASC、caspase1 p20以及IL-1β蛋白表达(P<0.05),并减少培养上清液内IL-1β水平(P<0.05).结论 AGEs可能通过诱导HAECs内ROS产生激活NLRP3炎症体导致细胞损伤.

NLRP3炎症小体在狼疮性肾炎中作用的研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,其发病机制极为复杂,随着研究的深入,炎症小体在狼疮性肾炎(LN)的发病中作用也逐渐受到重视.其中,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体是目前研究详尽的一类炎症体.我们对近年来NLRP3炎症小体在LN中作用的相关研究进行归纳总结,发现NLRP3炎症小体不仅在LN的发病中起着重要的作用,并通过循环免疫细胞和固有细胞参与肾脏损伤的过程.后介绍了两种NLRP3炎症小体的特异性抑制剂β-羟基丁酸酯和MCC950,为LN治疗提供了新的策略.

NLRP3炎症体与痛风的研究进展

痛风是由于机体血尿酸过饱和形成针状尿酸盐(Monosodium urate,MSU)沉积在关节腔导致的炎症.IL-1β是急性痛风性关节炎进程中重要的细胞因子,与炎症的产生以及炎症的级联放大反应有关,IL-1β的产生与细胞中炎症小体NLRP3复合体密切相关.研究者认为NLRP3炎症体是痛风性关节炎反应进程中的关键环节,痛风也被称为NLRP3炎症体相关疾病.本文综述了NLRP3炎症体与痛风的关系、相关机制,以及靶向NLRP3炎症体的小分子抑制剂,为今后寻找结构新颖、高效低毒的抗痛风新药的研究提供参考.

胆固醇结晶激活动脉粥样硬化斑块巨噬细胞NLRP3炎症体的途径

动脉粥样硬化既是胆固醇在血管壁聚集的疾病,也是发生在动脉壁的一种低强度慢性炎症形式.近年来有研究证实胆固醇结晶在动脉粥样硬化发生发展中具有重要作用.新的显微技术证实,胆固醇结晶在动脉粥样硬化斑块形成的早期即已出现,并与早期炎症有关.胆固醇结晶通过诱发局部炎症,促进大的脂质核心形成;刺破纤维帽,导致斑块破裂进而促进动脉粥样硬化斑块的进展.在影响斑块进程中,NLRP3炎症体的激活对此发挥了重要的作用.NLRP3炎症体是研究多明确的炎症体,其与非炎症性疾病的发生发展密切相关.以胆固醇结晶激活NLRP3炎症体的途径作为研究靶点,为动脉粥样硬化的诊断和治疗提供了新的思路和方法.该文就胆固醇结晶在动脉粥样硬化斑块中激活巨噬细胞NLRP3炎症体的两种途径做一综述.

NLRP 3炎症体活化及与心血管疾病的研究进展

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding domain and leucine-rich rep protein 3,NLRP3)炎症小体作为当前热点,其致动脉硬化作用已被众多实验证实.当机体遭遇有害因子刺激时,NLRP3炎症体可被激活并诱导半胱天冬酶前体(pro-caspase)裂解成有活性的caspase形式,促进炎症因子的成熟释放,参与体内的无菌炎症反应.NLRP3炎症体可被多种途径激活,通过促炎因子释放诱导心血管相关疾病.本综述拟对近年来有关NLRP3炎症体的活化机制及其与心血管疾病关系研究进展作一总结.

VGX-1027抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应

目的 探讨VGX-1027能否抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应.方法 将成年健康C57BL/6小鼠随机分为对照组、VGX-1027(50 mg·kg-1)+PBS组、PM2.5组、VGX-1027(12.5 mg·kg-1)+PM2.5组、VGX-1027(25 mg·kg-1)+PM2.5组和VGX-1027(50 mg·kg-1)+PM2.5组.小鼠在鼻腔滴入PBS或PM2.5混悬液(7.8 mg·kg-1)前1 h,腹腔注射PBS或相应剂量的VGX-1027,每天1次,连续2 d.24 h后,测定小鼠气道高反应,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色评估肺部炎症积分,ELISA检测BALF炎性因子水平,Western blot测定肺组织NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NLRP3和caspase-1的表达水平.结果 PM2.5鼻腔滴入引起明显的肺部炎症和气道高反应.12.5 mg·kg-1 VGX-1027不能抑制PM2.5介导的气道高反应和肺部炎症浸润;而25、50 mg·kg-1的VGX-1027明显抑制PM2.5介导的气道高反应和肺部炎症浸润,降低BALF中炎症细胞数量和炎性因子的水平;下调NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NL-RP3和caspase-1的表达水平.结论 VGX-1027可抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应.

EIF2 AK2和NLRP3相互作用影响细胞分泌IL-1β的研究

目的：研究真核细胞翻译起始因子2AK2(EIF2AK2)蛋白对Nod样受体蛋白3( NLRP3)炎症体激活及细胞分泌IL-1β的影响。方法在HEK-293细胞中，通过转染凋亡相关斑点样蛋白( ASC)、NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和促白细胞介素-1β(pro-IL-1β)基因构建NLRP3炎症体，并检测EIF2AK2蛋白过表达对细胞分泌炎症性细胞因子IL-1β的影响；通过免疫共沉淀研究EIF2AK2蛋白和NLRP3蛋白相互作用。后在人单核THP-1细胞中通过siRNA干扰验证EIF2AK2对IL-1β分泌水平的影响。结果在 HEK-293细胞中，过表达 EIF2AK2蛋白能激活NLRP3炎症体后诱导细胞分泌IL-1β，并且IL-1β分泌水平随EIF2AK2表达水平提高而增加。免疫共沉淀结果显示EIF2AK2蛋白能和NLRP3蛋白发生相互作用。 THP-1细胞中siRNA干扰抑制EIF2AK2表达后发现细胞分泌IL-1β减少。结论 EIF2AK2蛋白能调控NLRP3炎症体的激活从而影响细胞分泌促炎症因子IL-1β。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症体在眼科疾病中的研究进展

多种疾病的发生发展均与慢性低度炎症反应有关,其中免疫异常起重要作用.核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症体作为固有免疫系统的重要组成成分,已被证实在糖尿病、冠状动脉粥样硬化性心脏病、风湿免疫疾病及肿瘤等多种疾病中发挥重要作用.NLRP3炎症体可被多种代谢信号激活,进而引起caspase-1的活化,终导致细胞释放IL-1β和IL-18,诱发炎症级联反应,引发组织损伤.近来多项研究表明,NLRP3炎症体可能成为多种疾病新的治疗靶点.本文将对NLRP3炎症体的活化与调控机制及其在年龄相关性黄斑变性、角膜炎、葡萄膜炎、青光眼、干眼症、糖尿病视网膜病变及缺血再灌注损伤等眼科疾病中的研究进展及相关治疗前景进行综述.

NLRP3炎症体在肺损伤中的研究进展

新疆哈萨克族高血压患者外周血单个核细胞炎症激活与NLRP3炎症体通路相关性研究

目的:探讨新疆哈萨克族高血压患者外周血单个核细胞激活与NLRP3炎症体通路的相关性.方法:随机选取2013-09-2014-02新疆医科大学第一附属医院高血压科门诊首次就诊且未经降压药物治疗的新疆哈萨克族高血压患者30例,年龄(54.2±5.7)岁,选取同期同民族健康体检者30例,年龄(53.7±5.4)岁,两组男女比例均为1∶1.采集两组受试者外周血并分别提取血浆和单个核细胞,采用ELISA法检测血浆白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量;使用荧光定量RT-PCR检测单个核细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA相对表达水平;运用Western blot法检测单个核细胞中NLRP3和Caspase-1蛋白的相对表达量.结果:两组受试者基线资料差异无统计学意义(P＞0.05);与健康对照组相比,高血压组血浆IL-1β和IL-18水平明显升高(P＜0.05);外周血单个核细胞层NLRP3、Caspase-1、IL-1p和IL-18的mRNA相对表达量均高于对照组(P＜0.05);NLRP3和Caspase-1蛋白的表达量也较对照组增高(P＜0.05).结论:新疆哈萨克族高血压患者外周血单个核细胞处于一定程度的炎症激活状态,且该炎症反应可能与NLRP3炎症体及其下游相关细胞因子的表达增多有关.

NLRP3炎症体在血管疾病中的作用

NLRP3炎症小体是核苷酸结合和寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding and oligomerization domain-like receptors,NLRs)家族中的一种蛋白复合体,在固有免疫中发挥重要作用.当机体遭遇有害因子刺激时,NLRP3炎症体诱导pro-caspase 1裂解成具有活性的caspase 1,促进IL-1β,IL-18的成熟和释放,从而参与宿主抗感染和无菌性炎症反应.近年来大量研究表明NLRP3炎症体与血管疾病的发生发展密切相关,NLRP3炎症体参与的血管壁无菌性炎症反应在大、中、小及微血管的病理生理过程中起重要作用.

对比剂激活NLRP3炎症体通路诱导肾小管上皮细胞凋亡

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症体在对比剂所致肾小管上皮细胞凋亡过程中的作用及其相关机制.方法 将传代培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组:对照组(Con组);碘海醇组(O组);NLRP3基因沉默+碘海醇组(si-NLRP3+O组);凋亡相关斑点样蛋白(ASC)基因沉默+碘海醇组(si-ASC+O组);甘露醇组(M组).将不同浓度的低渗对比剂碘海醇加入HK-2细胞培养皿中分别孵育24、48、72 h.流式AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测细胞内NLRP3、ASC mRNA相对表达量;Western印迹法检测HK-2细胞内NLRP3、ASC、凋亡相关调控蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)/活化型caspase-8(cleaved caspase-8)、B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)、caspase-1/cleaved caspase-1、caspase-3/cleaved caspase-3蛋白相对表达量;ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素(IL) 1β、IL-18水平.结果 与对照组相比,碘海醇组HK-2细胞凋亡率升高;细胞内NLRP3、ASC mRNA相对表达量增多;NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白相对表达量增多;细胞上清中IL-1β、IL-18含量升高(均P＜0.05).提示碘海醇组HK-2细胞NLRP3炎症体被激活.与对照组相比,碘海醇组促凋亡蛋白cleaved caspase-8、Bax、cleaved easpase-3表达量增多;抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低(均P＜0.05).与碘海醇组相比,si-NLRP3+碘海醇组、si-ASC+碘海醇组HK-2细胞凋亡率显著降低;cleaved caspase-l表达量减少;促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3表达减少;抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增多;细胞上清中IL-1β、IL-18含量降低(均P＜0.05).结论 对比剂可激活HK-2细胞中NLRP3通路,诱导细胞凋亡,阻断NLRP3通路可减轻细胞凋亡.

肝细胞内NLRP3炎症体的表达与炎症应答初步研究

目的 探讨炎症体(inflammasome)在肝细胞内的表达,明确肝细胞内炎症体是否具有正常的炎症应答功能.方法 以肝细胞株L02、HepG2为研究模型,RT-PCR、Real-time PCR检测LPS刺激及未刺激组caspase-1、IL-1β的mRNA的表达水平;Western blot检测NLRP3的表达和各刺激组胞内caspase-1活化;ELISA检测各刺激组上清中IL-1β和IL-18的分泌.结果 L02、HepG2细胞均表达NLRP3炎症体,LPS刺激促进肝细胞内caspase-1、IL-1β 表达上调;内源性危险信号ATP能有效活化肝细胞内caspase-1酶原,促进IL-1β 和IL-18分泌增加,caspase-1特异性抑制剂能特异性的抑制IL-1[β、IL-18的分泌.结论 肝实质细胞的NLRP3炎症体对内源性危险信号具有炎症应答功能,在肝内无菌性炎症的启动和维持中可能具有重要促进作用.

NLRP3炎症体与胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能损伤的相关性研究

目的 探讨不同糖代谢人群中血清NLRP3炎症体(NACHT,LRP及PYD结构域蛋白)的表达及与胰岛素抵抗的相关性.方法 糖尿病组(DM)27例,糖尿病前期组(PD)30例,正常糖耐量组(NGT) 30例,测定血清中NLRP3、IL-1β、IL-18的水平,观察其在不同糖代谢人群中的变化规律及其相关性.结果 3组间NLRP3、IL-1β、IL-18水平,DM组＞PD组＞NGT组(P＜0.05).NLRP3与FBG、FINS、HOMA-IR、IL-1β、IL-18呈正相关,与HOMA-β呈负相关.结论 NLRP3在PD人群中即有表达增加,并且随着血糖逐步增高,慢性炎症损伤及胰岛素抵抗也逐渐加重.NLRP3炎症体可能是影响FBG、HOMA-IR及HOMA-β的重要因素.