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神经病靶标酯酶与Gβ2蛋白的相互作用
目的神经病靶标酯酶(NTE)被认为是有机磷引发迟发性神经毒性(OPIDN)的主要作用靶标,但NTE的生理功能并不清楚,妨碍了对OPIDN发生机制的阐明.本研究从信号转导角度出发,以期阐释NTE的生理功能,为揭示OPIDN的产生机制提供依据.
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不同刺激剂对人外周血淋巴细胞亚群增殖的影响
目的:采用流式细胞术分析PHA、PMA、IL-2对PBMC和全血不同培养体系中人外周血淋巴细胞亚群增殖的影响,为不同的实验目的选取合适的培养体系提供实验基础.方法:收集健康受试者(n=6)静脉血肝素钠抗凝样本(10 ml/样本),每个样本取300 μl全血并直接裂解红细胞经荧光染色后流式细胞术检测淋巴细胞亚群.在400 μl全血接种淋巴细胞自体血浆培养液中,分别加入3种不同刺激剂,37℃、5％ CO2培养箱中培养60h;2ml全血分离PBMC,淋巴细胞培养液中分别加入3种不同刺激剂,于37℃、5％ CO2培养箱中培养60h.培养物经荧光染色后流式细胞术分析淋巴细胞亚群变化.结果:分离的PBMC经PHA刺激后淋巴细胞主要表达CD4-CD8-CD3+淋巴母细胞;PMA刺激后CDTCD4+T淋巴细胞和CD3-CD19+B淋巴细胞比例下降(P＜0.01,P＜0.05);IL-2刺激后淋巴细胞亚群比例增殖前后无明显变化.全血自体血浆经PHA刺激后转化为CD4+CD3+T淋巴母细胞和CD8+CD3+T淋巴母细胞,B淋巴细胞和NK细胞未见表达;PMA刺激后转化为CD8+CD3+T淋巴母细胞和CD4-CD8-T淋巴细胞,B/NK细胞用表面标志物无法区分IL-2刺激后NK细胞比例明显增加(P＜0.05).结论:PMA刺激增殖作用快,IL-2对淋巴细胞亚群增殖前后比例影响小,PHA刺激淋巴细胞分裂代数更多.
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毛细胞黏液样星形细胞瘤和毛细胞星形细胞瘤的临床病理分析
毛细胞黏液样星形细胞瘤(PMA)是1999年Tihan等~([1])提出的一个肿瘤分类,是毛细胞星形细胞瘤(PA)的一个特殊亚型,两者在临床和病理学上有着不同之处,国内见陈莲等~([2])报道过4例,复发并演变为PMA者目前尚少见报道.我们对1例复发的PMA和12例PA进行回顾性分析,以进一步探讨两者的关系.
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毛细胞黏液型星形细胞瘤(附五例报告并文献复习)
毛细胞黏液型星形细胞瘤(pilomyxoid astrocytomas,PMA)是近来才被提出的一种星形细胞肿瘤,具有独特的组织病理学特点和临床特征.一些学者认为PMA是毛细胞型星形细胞瘤(pilocytic astrocytoma,PA)的一种变异,称之为PA的幼稚型;另一些学者认为PMA是一种独立的病变,或者是PA的不典型变异.随着研究的深入发现两者在生物学特性上有很大的差异,2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类将其划分为一个新的类型[1].国外报道PMA较多,但国内少见报道[2],笔者回顾性分析复旦大学附属华山医院2006年至2008年间收治的5例PMA患者资料,结合文献复习,报告如下.
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PMA诱导C6细胞rPer1,rDbp基因的近日节律表达
目的 寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况.方法 采用PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate),100 nmol/L)及50%的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞,RT-PCR检测不同时间点mPer1 mRNA的表达水平,比较两者的诱导效率;PMA刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞,RT-PCR检测不同时间点rPer1,rDbp mRNA的表达水平.结果 PMA及50%的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPer1的近日节律表达且诱导效率近似;并首次发现C6细胞的rPer1,rDbp基因存在着近日节律振荡. 结论 PMA是一种有效的体外节律诱导剂;经PMA诱导后,C6细胞的节律基因存在近日振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供依据.
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节律基因mClock在肿瘤实验化疗中的作用
目的 研究节律基因mClock在顺铂诱导小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)凋亡中的作用.方法 体外采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)诱导LLC细胞近日节律,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测细胞mClock基因的节律性表达.于诱导后不同时间点,顺铂(CDDP)处理细胞,24 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法和流式细胞术检测(FCM)其对细胞的增殖与凋亡的影响.采用脂质体介导方法将mClock基因转染至LLC细胞,顺铂处理细胞,24 h后MTT法和流式细胞术检测其对细胞的增殖与凋亡的影响.结果 PMA作用LLC后,mClock基因呈现节律性表达.PMA诱导LLC节律表达的不同时间点,细胞对顺铂的敏感性不同.mClock过表达使顺铂作用后LLC凋亡率下降,细胞增殖明显.结论 mClock能够抑制顺铂诱导LLC的凋亡.
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PMA诱导单核细胞分化过程中基质金属蛋白酶9的表达及其活性的变化
目的 应用单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型,研究单核细胞向巨噬细胞细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9表达及其活性的变化.方法 用乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)孵育THP-1细胞不同时间,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,RT-P CR观察MMP-9 mRNA表达的变化,Western blot观察MMP-9蛋白表达的变化,明胶酶谱(gelatinzymogram)分析法测定MMP-9活性的变化.结果 THP-1细胞经PMA孵育后,细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁,且MMP-9的表达明显上调,活性增加.结论 单核细胞向巨噬细胞分化的过程中,MMP-9的表达量及其活性明显增加.
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干预NF-κB信号通路对鼠脑皮层神经元自噬的影响
目的：研究观察干预NF-κB信号途径对脑皮层神经元自噬的影响。方法用PMA及PDTC作用于体外培养的大鼠脑皮层神经元,分别应用免疫细胞化学荧光法测定细胞核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)蛋白的表达,应用Western blot检测自噬蛋白Beclin 1表达情况。结果 PMA干预下神经元NF-κB蛋白表达及自噬指标均呈相关性升高,而经PDTC处理后上述变化均受不同程度的抑制。各指标激活及抑制程度均与药物作用剂量与时间相关。结论 NF-κB通路活化可能是启动大鼠脑皮层神经元不同程度的自噬进程的中心环节,而PDTC能够通过抑制NF-κB通路而抑制这些进程,但不能完全阻断这些进程。
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氮溴化丙锭与聚合酶链反应结合的细菌活细胞检测方法
目的:区分细菌PCR 过程中的死活菌.方法:使用叠氮溴化丙锭(PMA )处理提取样品的基因,使样品中死细胞的DNA 分子与PMA 发生共价交联,使其DNA 分子的PCR 扩增被抑制.结果:当浊度＜10 NTU 时,对死细胞DNA 的PCR 扩增,PMA 具备的抑制效用仍然有效;当浊度＞100 NTU 时,PMA 的抑制效果就会失去.而当样品中的PMA 质量浓度＞3 μg/ml 时,曝光时间就会超过3 min,PMA 可对死细胞DNA 的PCR 扩增进行抑制;PMA 质量浓度＞50 μg/ml 时,活细胞DNA 的PCR 扩增就会受到影响.结论:对异丙醇处理、热处理引起的细菌细胞膜破裂而产生的死细胞,可通过PMA 与PCR 结合的方法进行选择性地检测,能较好的区分死活菌.
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Elmo1上调中性粒细胞胞外诱捕网的形成
探讨Elmo1在中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trap,NET)形成过程中的作用机制.分别提取WT小鼠和Elmo1敲除小鼠的中性粒细胞后,用PMA诱导NET形成.运用激光扫描共聚焦显微镜对NET的形成进行观察,用多功能酶标仪读取荧光强度值并进行定量分析.为了进一步探索Elmo1调节NET形成的分子机制,我们用Western blotting检测了NET形成过程中相关信号通路的激活情况,包括p38和Akt.结果发现,Elmo1敲除的条件下,NET的形成明显减少.同时,在Elmo1敲除小鼠的中性粒细胞中,PMA诱发的p38和Akt的激活也显著降低.抑制p38、Akt后,WT和Elmo1敲除型小鼠之间NET形成的差异消失.说明Elmo1通过p38和Akt参与上调NET的形成.上述结果提示Elmo1参与上调NET形成.
关键词： Elmo1 中性粒细胞 PMA 中性粒细胞胞外诱捕网 -
LAIR-1对巨核细胞系Dami生长分化的影响作用
研究LAIR-1在巨核细胞系Dami上的表达,及其表达对细胞生长分化的影响,为深入研究LAIR-1在巨核细胞造血中的功能奠定基础.采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测LAIR-1分子的表达；应用CCK-8法、AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测LAIR-1对细胞增殖及凋亡的影响；应用PI染色流式细胞术检测LAIR-1对细胞倍性的影响.结果:LAIR-1在Dami细胞膜上低水平表达,PMA可以显著刺激其表达；应用特异性抗体或配体交联LAIR-1分子,与对照组相比,细胞的增殖降低、凋亡增多、分化过程中2N和4N的细胞较多、细胞上CD41a和CD42b的表达降低.提示,PMA可以显著诱导LAIR-1在Dami细胞上的膜表达；LAIR-1的表达抑制Dami细胞的增殖,刺激其凋亡,阻碍细胞核内DNA的复制,抑制细胞上CD41a和CD42b的表达.
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CRP及PMA在结肠癌诊治中的应用价值
恶性肿瘤与高凝状态或血栓前状态以及血栓形成都有密切联系[1].研究表明,结肠癌患者C反应蛋白(CRP)水平均有不同程度升高[2],但患者血小板-单核细胞聚集物(PMA)水平以及二者与血栓前状态的关系却未见报道.
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佛波脂和离子霉素对大鼠CD3/CD4/CD8分子表达的影响
目的 观察不同浓度的佛波酯(Phorbol myfismte acetate,PMA)和离子霉素(ionomycin,Ion)作为淋巴细胞激活剂对大鼠淋巴细胞表面分子表达的影响.方法 用不同浓度的PMA和Ion刺激大鼠淋巴细胞后,使用流式细胞仪检测其CD3/CD4/CD8表达的变化.结果 单独使用高工作液浓度的Ion(15、20μg/ml)对大鼠淋巴细胞表面CD4有显著下调作用,而中低浓度(2、5、10μg/m1)则影响不明显.单独使用低、中、高三种浓度(25、50、75ng/ml)PMA刺激,发现CD3/CD4/CD8无明显改变,分别以(2、5、10μg/ml)二种浓度的Ion联合高浓度PMA刺激后发现CD3/CD4/CD8也无明显改变.结论 在低于10μg/m1的Ion和低于75ng/ml的PMA浓度条件共同刺激下不会引起表面标记物,特别是CD4分子表达的改变,故有助于进行淋巴细胞刺激相关试验时选择合适的淋巴细胞刺激物浓度.
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荧光定量PCR结合EMA/PMA染色法快速检测军团菌活菌
目的:利用EMA/PMA经膜核酸染色结合荧光定量PCR技术快速检测军团菌活菌,比较两者的检测效率.方法:军团菌分别经加热灭活和氯消毒剂灭活,加入EMA/PMA处理,确定EMA/PCR、PMA/PCR体系和反应条件,之后进行快速检测.利用BacLight Live/Dead bacterial viability kit验证活菌,同时用培养法做比对.结果:EMA和PMA工作浓度分别为0μg/ml,5μg/ll,10μg/ml,25 μg/ml,50 μg/ml,100 μg/ml,将菌液与之混合后用卤素灯照射,时间分别为0 min,1min,5min,15 min,经测试确定EMA工作浓度为50μg/ml,而PMA为25 μg/ml,光照时间选用15 min.模拟环境样本检测,EMA/PMA real-time PCR检测限均为l04cfu/ml,但培养法PMA处理后平板上菌落多于EMA处理组.结论:EMA/PMA real-time PCR可快速检测军团菌活菌,检测效率相当(均低于不加染料组),PMA效果优于EMA.
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蛋白激酶C活性调节剂对豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的作用及意义
目的 研究蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA和抑制剂GF109203X对豚鼠近视眼视网膜Müller细胞生长状态及PKC蛋白表达的影响.方法 眼罩遮盖诱导近视模型,酶消化法培养其视网膜Müller细胞,并鉴定.PMA、GF109203X分别干预近视眼Müller细胞.MTT测细胞活力,TUNEL染色检测凋亡细胞,Westren blotting测PKC蛋白表达.结果 95%以上的培养细胞阳性表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(Vimentin).近视组PKC蛋白表达较正常组上调(P＜0.05).PMA、GF109203X均能引起近视眼Müller细胞的抑制率升高和诱导其凋亡(P＜0.05).PMA诱导近视眼Müller细胞PKC蛋白表达进一步上调,100nmol/L组和 1000nmol/L组表达量高于10nmol/L组(P＜0.05).1μmol/L和 10μmol/L GF109203X均能引起近视眼Müller细胞PKC蛋白表达下调,10μmol/L的抑制作用大于1μmol/L (P＜0.05).结论 PKC蛋白在豚鼠近视眼视网膜Müller细胞表达升高,且其表达受PMA和GF109203X调控.
关键词： 视网膜Müller细胞 蛋白激酶C 近视 PMA GF109203X -
双重抗血小板治疗对脑梗死患者血小板单核细胞聚集体的影响及急性期疗效评估
目的：通过对脑梗死患者血小板-单核细胞聚集体（platelet-monocyte aggregations，PMA）水平及神经功能缺损评分（美国国立卫生院神经功能缺损评分，NIHSS）变化的研究，探讨氯吡格雷与阿司匹林联合用药与阿司匹林单药治疗的疗效差异。方法将80例急性脑梗死患者随机分为单药组（阿司匹林100 mg/d）及联合用药组（阿司匹林100 mg/d+氯吡格雷75 mg/d）。使用流式细胞仪术检测所有病例PMA水平，对联合用药及单药组治疗前后PMA水平及NIHSS进行比较。结果治疗1周后，联合用药组PMA水平（24.67±4.09）较治疗前PMA水平（29.63±6.1）有显著下降，差异有统计学意义(P＜0.01)；治疗1周后单药组PMA水平（26.5±4.14）较治疗前PMA水平（29.44±5.21）有显著下降，差异有统计学意义(P＜0.01)；联合用药组治疗2周后PMA水平（19.51±3.26）及NIHSS（1.9±0.7）与单药组治疗2周后PMA水平（24.57±4.8）及NIHSS（3.5±1.3）比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。结论与单用阿司匹林比较，阿司匹林联合氯吡格雷能更有效抑制血小板活化，并能改善脑梗死患者局灶神经功能缺损症状。
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不同浓度的PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB表达的影响
目的 探讨不同浓度的PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB表达的影响.方法 按照不同浓度的PMA及PDTC作用对纯化培养的大鼠星形胶质细胞进行分组,各组分别作用不同时间点后,运用免疫细胞化学方法进行NF-κB蛋白表达测定,进行干预因素和蛋白表达结果的相关分析.结果 PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB的活化和抑制作用呈现剂量与时间依赖性,24h达高峰.结论 可采用PMA及PDTC创建星形胶质细胞NF-κB蛋白不同水平表达模型.
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大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化研究
目的建立N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)、佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,PMA)对大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化模型.方法通过克隆形成率实验确定MNNG、PMA对IEC-6细胞转化浓度,对IEC-6细胞进行分阶段多次干预.用软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度.结果经MNNG、PMA多次处理IEC-6细胞至24次后,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第24次之前的细胞则不能在软琼脂上生长.转化细胞在裸鼠体内形成瘤,病理组织学证实为低分化肠上皮细胞癌.结论 MNNG、PMA具有使IEC-6细胞发生恶性转化的能力.
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PMA诱导小鼠Lewis肺癌细胞节律基因的表达
目的 采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况.方法 采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),RT-PCR检测不同时间点moPer1的mRNA表达水平.Real-time PCR和RT-PCR检测mClock的mRNA表达水平.结果 发现LLC细胞的节律基因mClock、mPer1存在近日节律振荡.结论 经PMA诱导后,LLC细胞的节律基因存在近日节律振荡,为体外研究授时因子时近日节律的导引机制提供证据.
关键词： 近日节律 PMA mClock mPer1 小鼠lewis肺癌细胞 -
PMA诱导节律基因表达对细胞紫外线损伤的影响
目的 研究诱导NIH3T3细胞节律基因表达对细胞紫外线损伤的影响.方法 用体外节律诱导剂乙酰肉豆蔻佛波酯诱导NIH-3T3细胞节律基因表达.分别选择mPer2基因表达的谷值和峰值时刻对细胞进行紫外线照射,以非诱导节律的单纯照射组为对照,通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,平板克隆形成试验检测细胞增殖情况.结果 mPer2基因表达峰值时进行紫外线照射的细胞,与mPer2基因表达谷值时和非诱导节律紫外线照射细胞比较,增殖能力强、凋亡率低、G1期阻滞明显.结论 节律基因诱导的NIH3T3细胞的紫外线损伤减小,并与mPer2的基因表达相关,其保护作用可能与mPer2基因过表达有关.
关键词： 近日节律 PMA mPeriod2基因 紫外线照射 DNA损伤
