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K562细胞为基础的人工抗原提呈细胞用于过继性免疫治疗的研究进展
过继性T细胞治疗是目前肿瘤免疫疗法中具发展潜力的治疗方法之一.过继性T细胞治疗须首先在体外制备抗肿瘤T细胞,并选择性地扩增理想的T细胞亚群,其目的是在癌症病人体内重建针对肿瘤的特异性免疫反应,从而建立终身持久的免疫记忆.本文就K562细胞为基础的aAPCs及其应用于过继性T细胞治疗的研究现状和前景进行综述.
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人工抗原提呈细胞体外激活肝癌CD8+T细胞
目的:探讨人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cell,aAPC)K32/4-IBBL/CD86对肝癌CD8+T细胞的活化作用.方法:磁珠法分选HLA-A 2阳性肝癌患者外周血CD8+T细胞,aAPC与CD8+T细胞按不同比例(1∶1、1∶2、1∶3)混合培养,诱导CTL.锥虫蓝拒染法测定CTL的生长曲线,MTS/PMS法检测CTL的增殖,流式细胞术检测CTL分泌IFN-γ的能力,MTT法检测CTL对人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞的杀伤作用.结果:肝癌患者外周血CD8+T细胞经aAPC作用后,增殖能力明显增强,按1∶1、1∶2、1∶3比例混合培养后第8天分别为(21.2±2.5)×105、(17.6±3.2) ×105、(15.3±2.8) ×105,明显高于对照组的(8.5±0.15) ×105(P＜0.01),混合培养后分泌IFN-γ的CTL比例分别为(26.2±1.91)％、(21.3±1.38)％、(18.6±1.20)％,明显高于对照组的(0.1±0.02)％(P＜0.01).aAPC活化的CTL对BEL7402细胞和自体肝癌细胞的杀伤率较对照组显著增强,按1∶3混合培养后得到的CTL对BEL7402细胞和自体肝癌细胞的杀伤率分别为(21.8±4.3)％和(25.6±3.6)％,明显高于对照组的(3.8±1.8)％和(3.8±2.0)％(P＜0.01)；效靶比为50∶1时,1∶1混合培养组CTL对BEL7402细胞的杀伤率(56.8±3.0)％和对自体肝癌细胞的杀伤率(64.8±4.2)％明显高于1∶2混合培养组的(44.3±2.6)％、(56.1±3.4)％和1∶3混合培养组的(38.9±4.7)％、(46.2±4.7)％(P＜0.05).结论:aAPC在体外可高效活化肝癌患者CD8+T细胞,诱导CTL分泌IFN-γ,且CTL对人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞具有明显的杀伤作用.
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特异性人工抗原提呈细胞体外激活CD19嵌合抗原受体T细胞的构建
目的 构建CD19特异性人工抗原提呈细胞(aAPC)用于体外激活扩增CD19嵌合抗原受体(CAR)修饰T细胞(CD19-CAR-T),并考察其杀伤效应.方法 通过慢病毒介导的方法制备以NIH3T3为细胞骨架、表达共刺激分子CD86和/或CD137L的CD19特异性aAPC (NIH3T3-CD 19/86、NIH3T3-CD19/86/137L).采用照射的CD19特异性aAPC与CD 19-CAR-T细胞按一定比例混合培养激活扩增CD19-CAR-T细胞,台盼蓝染色法检测并绘制CD 19-CAR-T细胞生长曲线;流式细胞术检测CD19-CAR-T细胞CAR表达变化及分化表型;生物发光细胞毒性法检测扩增的CD19-CAR-T细胞体外靶特异杀伤效应.结果 流式检测结果显示NIH3T3-CD19/86和NIH3T3-CD19/86/137L细胞表面分别高表达CD19、CD86和/或CD137L分子;NIH3T3-CD19/86和NIH3T3-CD19/86/137L细胞都能够高效扩增CD 19-CAR-T细胞,NIH3T3-CD19/86/137L细胞具有更好的扩增效应,其与CD19-CAR-T细胞混合培养14d后,扩增的T细胞数量明显高于NIH3T3-CD19/86细胞组(P＜0.05);同时,与刺激前相比NIH3T3-CD 19/86和NIH3T3-CD19/86/137L细胞刺激扩增的T细胞中CD19-CAR-T细胞比例显著增加(P＜0.05);扩增的CD 19-CAR-T细胞具有靶特异杀伤效应,能够特异性杀伤CD19阳性靶细胞;流式检测显示NIH3T3-CD19/86/137L扩增的CD19-CAR-T细胞含有约20％作用中心记忆性T细胞.结论 成功制备CD19特异性aAPC,其可在体外特异性扩增功能性CD 19-CAR-T细胞,为初步建立制备高质量临床级CD19-CART细胞的方法提供了技术支撑.
关键词： 人工抗原提呈细胞 CD19 嵌合抗原受体修饰T细胞 增殖 杀伤
