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CYP2E1在小鼠1,2-二氯乙烷中毒性肝损伤中的作用
目的 探讨亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)染毒对小鼠肝微粒体中CYP2E1表达的影响及其在1,2-DCE中毒性肝损伤中的作用.方法 (1)将32只昆明种雌性小鼠随机分为对照组及1,2-DCE低、中和高剂量染毒组,染毒剂量分别为0.225、0.45和0.9 g/m3.采用静式吸入方式对小鼠染毒10 d,末次染毒的次日,处死小鼠,迅速取血和肝组织.对肝组织进行病理学观察,并检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和活性.(2)将60只昆明种雌性小鼠随机分为空白对照组、玉米油对照组、二烯丙基硫化物(DAS)对照组、单纯染毒组及低和高剂量DAS干预组(150和300 mg/kg).将DAS溶于玉米油中,于1,2-DCE染毒前4h通过灌胃给予DAS.1,2-DCE染毒时间及检测指标同上.结果 (1)中、高剂量染毒组小鼠肝组织出现不同程度病理性损伤;高剂量染毒组小鼠血清中ALT活性显著高于对照组(P＜0.05);中、高剂量染毒组小鼠肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和活性与对照组相比均显著升高(P＜0.05).(2)高剂量DAS干预组小鼠肝细胞病理损伤明显改善,其小鼠血清中ALT活性也显著低于单纯染毒组(P＜0.05);低、高剂量DAS干预组小鼠肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和酶活性均显著低于单纯染毒组(P＜0.05).结论 1,2-DCE染毒可明显诱导肝微粒体中CYP2E1蛋白的表达,并导致肝组织损伤,DAS通过抑制CYP2E1蛋白的表达可以减轻1,2-DCE引起的肝损伤.
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二烯丙基硫化物对百草枯中毒大鼠的抗炎机制
目的 探讨二烯丙基硫化物(DAS)对急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核转录因子-κB (NF-κB)蛋白的影响.方法 将45只Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组(NS)、PQ中毒模型组及DAS治疗组,每组15只.将百草枯溶液(70 mg/kg)一次性灌胃制备中毒模型;对照组灌胃等量生理盐水.制模后分别经腹腔注射DAS 100 mg/kg(DAS治疗组)、等量生理盐水(模型组和对照组),定时每日1次,共14 d.各组分别于制模后3、7、14d随机各组处死5只大鼠.根据不同时间将各组动物用3.6％水合氯醛腹腔注射麻醉,解剖胸腔暴露肺,行支气管肺泡灌洗,收集灌洗液测定肺泡灌洗液中蛋白含量并分离培养肺泡巨噬细胞(AM);用免疫细胞化学方法测定AM中NF-κB的表达.结果 ①大鼠原代巨噬细胞的分离培养:采用差速贴壁的方法分离纯化肺泡巨噬细胞,30 min可以见到较多的巨噬细胞贴壁.②支气管肺泡灌洗液蛋白含量测定:NS组和PQ组比较,支气管肺泡灌洗液中蛋白含量3 d(261.6±17.16) μg/mL vs.(673.4±151.9) μg/mL;7 d(265.6±18.37) μg/mL vs.(581.3 ±134.58)μg/mL;14 d(253.8 ±11.43) μg/mL vs.(589.07 ±33.85) μg/mL,均P＜0.05.PQ组和DAS组比较支气管肺泡灌洗液中蛋白含量3d (673.4±151.9) μg/mL vs.(342.9±39.03) μg/mL;7d(581.3±134.58) μg/mL vs.(383.7 ±7.37) μg/mL,P＜0.05;14 d(589.07±33.85) μg/mL vs.(282.9±15.59) μg/mL,P＜0.05.③免疫细胞化学结果NS组和DAS组肺泡巨噬细胞质有极少量NF-κB p65阳性表达;PQ组细胞核中有较多NF-κB p65阳性表达;DAS治疗组中NF-κB p65阳性表达较模型组明显减少,吸光度积分值NS组与PQ组比较,PQ组与DAS组比较,差异均有统计学意义,P＜0.05.结论 DAS能下调PQ中毒大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB的达,减少支气管肺泡灌洗液中蛋白量,故DAS具有一定抑制炎症介质释放,减少炎性渗出的作用.
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二烯丙基硫化物对百草枯中毒急性肺损伤大鼠的抗氧化作用
目的：探讨二烯丙基硫化物（DAS）对百草枯（PQ）中毒大鼠急性肺损伤的影响。方法100只雄性Wistar大鼠随机分为5组，正常对照组、PQ 70 mg·kg-1模型组、DAS 25，50和100 mg·kg-1治疗组，每组20只。一次性ig给予PQ 70 mg·kg-1制备PQ中毒模型，DAS组于造模前、后30 min ip给予相应剂量药物，正常对照组ip给予等量生理盐水。各组分别于造模后1，3，6和12 h麻醉大鼠，取右肺下叶进行HE染色，光镜下观察肺组织病理损伤程度并评分；右肺上叶进行肺组织一氧化氮（NO）含量检测；左肺进行支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞（AM），培养24 h取上清，分光光度法测定诱导型一氧化氮合酶（iNOS）含量；培养至72 h，采用细胞免疫化学方法检测AM中iNOS蛋白的表达。结果与正常对照组比较，模型组肺泡结构破坏严重，病理评分明显升高（P<0.01），肺组织中NO含量明显升高（P<0.01），AM培养上清液中iNOS含量明显升高（P<0.01），iNOS蛋白表达增加（P<0.05）；与模型组比较，DAS 50 mg·kg-1组在造模后3，6和12 h以及DAS 100 mg·kg-1组在造模后1，3，6和12 h肺泡结构损伤显著减轻，病理评分降低（P<0.05）；DAS 25和50 mg·kg-1组肺组织中NO和iNOS含量及iNOS蛋白表达减少（P<0.05），DAS 100 mg·kg-1组NO含量减少更为明显（P<0.01）。结论 DAS可能通过抑制PQ中毒大鼠肺组织中的氧化损伤因子减轻肺损伤。
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二烯丙基硫化物可下调百草枯中毒大鼠肺组织核转录因子-κB蛋白及肿瘤坏死因子-αmRNA表达
目的：探讨二烯丙基硫化物（DAS）对百草枯中毒所致大鼠急性肺损伤（ALI）的器官保护作用及抗炎机制。方法将80只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、地塞米松（DXM）治疗组及DAS治疗组，每组20只。一次性灌胃百草枯溶液70 mg/kg制备中毒模型；对照组灌胃等量生理盐水。制模后当日分别经腹腔注射DAS 100 mg/kg（DAS治疗组）、等量生理盐水（模型组）或DXM 1 mg/kg（DXM治疗组），均每日1次，共14 d。各组分别于制模后1、3、7、14 d随机处死5只大鼠，取右肺下叶行苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肺损伤程度；取右肺上叶计算湿/干质量（W/D）比值，评价肺水肿程度；取右肺中叶,采用免疫组化检测核转录因子-κB（NF-κB）表达；取左肺采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达。结果① HE染色显示：对照组肺组织肺泡结构完整；模型组病理改变逐渐加重，肺泡壁结构破坏、肺间质水肿及大量巨噬细胞、中性粒细胞浸润，并伴有炎细胞移行至肺泡腔，部分肺泡腔内形成透明膜； DAS治疗组和DXM治疗组肺间质有部分增生、少量炎性细胞浸润，肺泡结构均无明显破坏。②肺W/D比值：模型组各时间点肺W/D比值明显高于对照组，3 d时达高值（6.15±0.54比4.15±2.10，P＜0.05）；DAS治疗组和DXM治疗组各时间点肺W/D比值明显低于模型组，以3 d为明显（3.99±1.26、4.30±0.70比6.15±0.54，均P＜0.05）；而DAS治疗组与DXM治疗组比较均无明显差异。③免疫组化显示：对照组细胞质有极少量NF-κBp65阳性表达；模型组细胞核中有较多NF-κBp65阳性表达；DAS治疗组和DXM治疗组细胞质中有少量NF-κBp65阳性表达，细胞核中无明显NF-κBp65阳性表达。积分A值明显低于模型组，以3 d为明显〔（17.98±0.06）×107、（18.53±0.04）×107比（28.85±0.61）×107，均P＜0.01〕；而DAS治疗组与DXM治疗组比较均无明显差异。④ RT-PCR显示：3 d时模型组肺组织TNF-α mRNA表达明显高于对照组（灰度值：3.63±0.62比0.51±0.13，P＜0.05）；DAS治疗组和DXM治疗组肺组织TNF-α mRNA表达较模型组明显下降（灰度值：2.49±0.57、2.02±0.26比3.63±0.62，均P＜0.05），而DAS治疗组与DXM治疗组比较无明显差异。结论腹腔注射DAS能降低百草枯诱导大鼠ALI时的肺部毛细血管通透性增加，减轻肺水肿，抑制肺组织中NF-κB、TNF-α表达，改善肺组织炎症病理改变。
