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铅对大鼠脑区POU蛋白Brn-3a的mRNA转录水平的影响
目的 探讨铅对大鼠中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a基因mRNA转录水平的影响.方法 雌性大鼠经围产期饮水染铅(对照组蒸馏水、低铅组0.5g/L、中铅组1.0g/L、高铅组2.0g/L)后,对其21日龄仔鼠不同脑区的Brn-3a mRNA基因转录水平进行了观察,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和组织原位杂交半定量检测Brn-3a的mRNA水平.结果 RT-PCR凝胶成像系统结果显示,各染铅剂量组脑组织海马区扩增产物的电泳条带密度与对照组相比差异有显著性(P《0.05),皮层及小脑部位与对照组相比差异无显著性.原位杂交检测Brn-3a的mRNA图像分析结果显示,高铅组与对照组相比,在大脑皮层和海马部位可见平均灰度值升高(P《0.05),表明mRNA的表达量减弱,而小脑部位未见明显变化.在海马部位还可见阳性面积比显著下降(P《0.01).结论 结果表明,仔鼠大脑海马区Brn-3a基因转录水平有所下降,Brn-3a作为转录调节因子参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程.
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孕鼠铅暴露对仔鼠脑组织POU域蛋白Brn-3a基因转录及蛋白表达的影响
目的 探讨铅对中枢神经系统神经细胞内转录因子Bm-3a表达的影响.方法 雌性大鼠在围产期经饮水染铅(对照组蒸馏水、染铅组低0.5s/L、中1.0g/L、高2.0g/L),观察21日龄仔鼠脑组织,采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测Brn-3a的mRNA转录水平,采用免疫组织化学方法检测Bm.3a蛋白表达水平.结果 RT-PCR凝胶成像系统结果分析表明,各染铅剂量组脑组织海马区扩增产物的电泳条带密度与对照组相比其差异有显著性(P<0.05),表明mRNA的表达量减弱.免疫组织化学图像分析表明,各染铅组脑组织皮层、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比[Aa(%)]、平均灰度与对照组相比其差异有不同程度的显著性(P<0.05或P<0.01),并呈剂量-依赖性的变化.染铅组Brn-3a表达低于时照组.结论 本研究的铅暴露动物模型脑组织观察到,大鼠脑组织基因转录水平和蛋白表达水平有所下降,表明铅干扰了Brn-3a蛋白的正常表达模式,因此干扰了神经细胞的正常分化.
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铅对海马神经细胞Brn-3a表达的影响与致凋亡作用
目的探讨体外条件下铅对神经细胞内转录因子Brn-3a的表达和致凋亡作用.方法采用海马神经细胞体外培养建立细胞模型,醋酸铅的染毒浓度分别为0.1、1、10、100、1000μmol/L,对照组给予等量培养液.染毒后24h及48h时MTT法测定各组细胞的存活率;免疫组织化学法测定Brn-3a的表达以及TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果引起海马神经细胞存活率明显下降的醋酸铅的低浓度是10μmol/L,醋酸铅浓度越高,细胞存活率越低.1μmol/L醋酸铅可引起Brn-3a阳性细胞积分光密度显著下降(P＜0.05),10μmol/L醋酸铅可引起Brn-3a阳性面积比的显著下降(P＜0.01).1μmol/L是醋酸铅引起培养海马神经细胞凋亡的低浓度,各组细胞凋亡程度呈现明显的浓度依赖效应.结论铅对发育期海马组织的损害至少部分是与铅所致神经细胞凋亡相关联的,并且铅导致培养海马神经细胞Brn-3a的表达下降很可能是铅诱导神经细胞凋亡的原因之一.
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Brn-3a和MDM-2在宫颈癌及癌前病变中的表达
目的:探讨Brn-3a和MDM-2在宫颈癌和癌前病变中的表达及其作为宫颈癌和癌前病变生物标志物的可行性和临床意义.方法:利用SP免疫组化法检测110例蜡块标本中Brn-3a和MDM-2的表达.结果:宫颈癌及癌前病变各组的Brn-3a表达阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);SCC组及CINⅢ组的MDM-2表达阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),SCC组与CIN Ⅰ组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Brn-3a NtMDM-2在各临床分期及组织学分级中的阳性表达无统计学差异(P＞0.05)Brn-3a与MDM-2蛋白阳性表达之间无相关关系(P＞0.05).结论:Brn-3a和MDM-2可作为宫颈癌前病变的生物标志物.
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Brn-3a、MDM-2、64SCTCA技术在宫颈癌中的应用
2009年2月～2011年3月,我们利用SP免疫组化法检测55例宫颈癌标本中Brn-3a 和MDM-2 的表达,同时行64SCTCA 检查,旨在了解两者与宫颈癌的相关性.1 对象与方法1.1 研究对象随机选取病理科明确诊断的石蜡片共55例.其中正常宫颈组织(因患子宫肌瘤行全子宫切除术)10例(对照组),CINI 组10例、CINⅡ组10例、CIN Ⅲ组(CIN Ⅲ及原位癌)10例、SCC 组(鳞状细胞癌)15例.CINⅢ组和SCC 组依据2000年的FIGO 分期标准,分为0期组9例、I期组6例、Ⅱ期组8例、Ⅲ期组2例、无Ⅳ期;SCC组按照组织学细胞分化程度分为:I级8例(高分化组)、Ⅱ级5例及Ⅲ级2例(中低分化组).所选研究对象同时行64SCTCA 检查,术前均未接受放疗和化疗.
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转录因子Brn-3a的研究及其与宫颈癌的关系
Brn-3a转录因子主要表达于周围神经系统的神经元亚群中,参与神经元的生存和分化相关基因的激活.对Bm-3a的调节包括启动子调节、磷酸化和尤文氏肉瘤蛋白的激活作用.而Brn-3a对神经细胞的调节包括抑制bHLH基因NeuroD4(Math3)和NeuroD1、影响p53的作用、激活α-Internexin启动子、控制感觉神经元中酪氨酸激酶受体A(TrkA)表达及与甾体激素受体共活化物(Src-1)交互作用等.人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈癌的关键因素.已有研究表明Brn-3a与人乳头瘤病毒感染后引起的宫颈细胞癌变有关.但其具体机制及与不同型别人乳头瘤病毒感染的关系等尚有待进一步研究.
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雌鼠围产期染铅对仔鼠脑组织Brn-3a基因转录及蛋白表达的影响
[目的]探讨雌鼠围产期染铅对仔鼠中枢神经系统神经细胞内Brn-3a基园转录及蛋白的影响.[方法]雌性大鼠在围产期经饮水染铅,分为低(0.5 g/L)、中(1.0g/L)、高(2.0g/L)3个染铅组,对照组饮用蒸馏水.取21日龄仔鼠脑组织进行观察,采用组织原位杂交半定量方法检测Brn-3a基因mRNA转录水平,采用免疫组织化学方法检测Brn-3a蛋白表达水平.[结果]原位杂交检测Brn-3a基因mRNA图像分析结果表明,高铅组与对照组相比,大脑皮质和海马部位平均灰度值升高(P<0.05),表明mRNA的表达量减弱,海马部位阳性面积比明显下降(P<0.01).免疫组织化学图像分析表明,与对照组相比,各染铅组大脑皮质、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比[Aa(%)]、平均灰度的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性关系.染铅组Brn-3a蛋白表达低干对照组.[结论]大鼠脑组织基因转录水平和蛋白表达水平有所下降,提示在本实验染毒剂量下,铅干扰了Brn-3a蛋白的正常表达模式.
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Brn-3a在宫颈病变中的表达及其与HPV亚型的相关性研究
目的:初步探讨Brn-3a在HPV所致各级别宫颈病变中的表达及不同HPV亚型与Brn-3a表达的关系,探讨其作为CIN诊断和治疗标志物的可行性.方法:按照入组标准选取研究期间在我院就诊的月经正常、有性生活史的妇女97例为研究对象.对同一位患者的宫颈脱落细胞同时进行转录因子Brn-3a的表达及HPV分型的检测.分析每组样本Brn-3a的表达.结果:Brn-3a表达随着病变加重而升高.高级别CIN(CIN Ⅱ、Ⅲ及原位癌)LEEP术后随访组Brn-3a表达高于宫颈良性病变(HPV-)组,差异有统计学意义(P=0.0000,<0.05);该组平均值虽高于HPV感染(HPV+)、宫颈湿疣与CIN Ⅰ组,但二者无统计学差异(P=0.6815,>0.05);与高级别CIN组(治疗前)相比,表达量明显减少,差异有统计学意义(P=0.0002,<0.05).不同HPV亚型所致的同级别病变中Brn-3a表达差异无统计学意义;高危型和低危型HPV感染所致的CIN Ⅰ以下病变组中,Brn-3a表达无统计学差异(P=0.5815);同种HPV亚型所致的不同病变级别Brn-3a表达有统计学差异.结论:转录因子Brn-3a表达与HPV所致宫颈病变的病理级别相关,并非简单的反映HPV的感染状态.
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P16INK4A、ΔNP63与Brn-3a作为宫颈上皮内瘤变标志物的研究
目的:探讨肿瘤抑制基因P16INK4A、凋亡相关基因异构体ΔNP63和细胞转录因子Brn-3a在各级宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的TCT标本中的表达及其作为CIN生物标志物的可行性和临床意义.方法:利用SP免疫组化法检测71例TCT标本中P16INK4A和ΔNP63的表达;用RT-PCR法检测各标本中Brn-3a mRNA的转录,分析它们与CIN病理分级的关系.结果:各级病理学诊断中P16INK4A与ΔNP63阳性率分别为炎症(4.76%/4.76%),CINⅠ(89.47%/84.21%),CINⅡ(100%/100%),CINⅢ(100%/100%),各级CIN与炎症的P16INK4A和ΔNP63阳性率之间,差异有极显著性(P＜0.001),各级CIN的阳性率之间,差异无统计学意义(P＞0.05).Brn-3a的表达阳性率分别为炎症(0%),CINⅠ(5.26%),CINⅡ(50%),CINⅢ(90.48%),CINⅢ的Brn-3a阳性率明显高于与炎症、CINⅠ组(P＜0.01),炎症与CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:P16INK4A、P63与Brn-3a可作为CIN的标志物,辅助细胞学筛查,Brn-3a可能成为间接反映CIN发展的生物学指标.
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慢性高眼压大鼠模型视网膜中Brn-3a表达的动态变化
背景 Brn-3a是近发现的一种视网膜神经节细胞(RGCs)特异性标记物.高眼压的视功能损害主要与RGCs损伤有关,但高眼压大鼠视网膜损伤与Brn-3a表达的关系尚不清楚.目的 观察慢性高眼压大鼠不同时期眼压、视网膜的形态学和Brn-3a表达的变化.方法 将35只健康成年SD大鼠用随机数字表法随机分为正常对照组5只和模型组30只,术前测量眼压.模型组大鼠一侧眼用Shareef-Sharma手术方法建立慢性高眼压模型,对侧眼只切开结膜,不烙闭巩膜表层静脉作为伪手术眼.按照术后不同处理时间随机将模型组分为术后1、3、5、7、14、28 d组共6个亚组,每组5只.分别于术前及术后30 min,1、3、7、14、28 d用Tono-Pen接触式眼压笔测量双眼眼压.各模型组于术后各相应时间点与正常对照组分别取5只大鼠过量麻醉处死,制作视网膜石蜡切片行常规组织病理学检查,评价视网膜形态变化,用甲苯胺蓝染色法计数RGCs,采用免疫组织化学法检测各时间点各组大鼠Brn-3a在RGCs中的表达.结果 高眼压模型组大鼠术后各时间点眼压均明显高于术前,差异有统计学意义(F=95.631,P=0.001),术后28 d时眼压是正常对照组大鼠眼压的1.59倍.与伪手术眼相比,模型眼术后各时间点眼压均明显升高,差异均有统计学意义(q=18.418、15.261、10.987、6.931、4.975、2.962,P＜0.05).正常对照组RGCs数量为(29.08±1.98)个/高倍视野,造模后3、5、7、14、28 d组大鼠RGCs计数逐渐下降,差异均有统计学意义(t=5.943、8.034、15.023、17.004、19.371,P＜0.05).免疫组织化学染色表明,随着造模时间的延长,各组Brn-3a阳性RGCs数量逐渐下降,差异有统计学意义(F=127.583,P=0.000).结论 采用Shareef-Sharma法可成功建立大鼠慢性高眼压动物模型,其眼压为中等程度升高；高眼压持续时间越长,RGCs的丢失越多.Brn-3a仅在RGCs层表达,随眼压持续时间的增加,Brn-3a的表达减少.
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HPV16 E7和Brn-3a在宫颈癌前病变中的表达及其意义
目的 研究HPV16 E7和Brn-3a在各级宫颈癌前病变(CIN)中的表达情况以及两者之间的关系,从分子生物学水平探讨其作为宫颈癌前病变的特异性标志物的可能性,以期寻找新的宫颈癌前病变筛查方法.方法 对71例患者行宫颈薄层细胞学检查(Thinprep Cell Test,TCT),并在阴道镜下组织学活检,其TCT残留标本,用RT-PCR法检测各标本中HPV16 E7和Brn-3a的表达.结果 HPV16E7和Brn-3a表达按细胞学分级和病理学分级其阳性率呈逐级增高趋势,差异均有显著性(P＜0.0001).两者作为宫颈癌前病变和HPV活化状态的诊断标志物,其结果是一致的(P＜0.05).结论 TCT残留标本适合进行RT-PCR分析研究.HPV16 E7可作为宫颈癌前病变和HPV活化状态的生物标志物.Brn-3a可作为可靠的CIN3生物标志物和HPV致癌基因转录活化的标志物.HPV16 E7和Brn-3a相互作用,可能为宫颈高度癌变发展的原因之一.
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铅暴露母体的仔鼠脑组织Brn-3a mRNA转录水平变化
目的 研究铅暴露母体的仔鼠脑组织中POU域蛋白Brn-3a mRNA转录的情况.方法 雌性大鼠自妊娠第15天开始经饮水染铅(2.0 g/L,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21 d断乳为止.随机取各组仔鼠断头,制作冰冻切片,采用原位杂交检测Brn 3a mRNA水平.结果 与对照组相比,大脑皮层和海马部位可见Brn 3a mRNA平均灰度值升高(P<0.05),表明mRNA的表达量减弱,而小脑部位未见明显变化(P＞0.05).海马部位还可见阳性面积比下降有显著性(P<0.01).结论 不同脑区,Brn 3a基因转录水平有不同程度的下降,提示铅可能干扰了Brn 3a的正常表达模式,并由此影响神经元的正常分化.
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Brn-3a、PPAR-γ在宫颈癌及癌前病变中的表达
目的 探讨Bm-3α、PPAR-γ在宫颈癌和癌前病变中的表达及其作为宫颈癌和癌前病变生物标志物的可行性和临床意义.方法 利用SP免疫组化法检测110例蜡块不同地理标本中Brn-3α、PPAR-γ的表达.结果 Brn-3a的表达阳性率对照组10.0%,CIN Ⅰ组45.0%,CINⅡ组50.0%,CINⅢ组55.0%,SCC组76.7%,宫颈癌及癌前病变各组的阳性率均高于对照组,有统计学意义(P＜0.05);PPAR-γ的表达阳性率对照组5.0%,CIN Ⅰ组25.0%CIN Ⅱ组40.0%,CINⅢ组45.0%,SCC组56.7%;SCC组及CINⅢ组的阳性率均高于对照组,有统计学意义(P＜0.05),SCC组与CIN Ⅰ组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Bm-3α、PPAR-γ在各临床分期及组织学分级中的阳性表达无统计学意义(P＞0.05);Brn-3a蛋白阳性表达和PPAR-γ蛋白阳性表达之间无相关关系(P＞0.05).结论 Brn-3a、PPAR-γ在宫颈癌及癌前病变组织呈高表达,可作为宫颈癌前病变的生物标志物.
