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采用微团培养技术探讨双酚A的体外发育毒性
采用微团培养观察了不同浓度的双酚A(0～50mg/L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响,旨在了解双酚A的体外发育毒性特点及其可能的作用机制.结果显示:双酚A对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用,表现为染毒组肢芽细胞集落形成数量减少,细胞毒性试验吸光度值下降,并呈现出明显的剂量-反应关系.双酚A对肢芽细胞的50%增殖抑制浓度(IP50)和50%分化抑制浓度(ID50)分别为38.74mg/L 和27.93mg/L,IP50/ID50=1.39.按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准,双酚A属于阳性致畸物,对肢芽细胞的分化和增殖有特异性抑制作用.
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对-壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响
目的了解对-壬基酚(p-NP)的体外发育毒性特点,为揭示对-壬基酚的发育毒性作用机制提供实验依据.方法采用微团培养观察不同浓度的对-壬基酚(0～17.5 mg/L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响.结果对-壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用,表现为染毒组肢芽细胞集落形成率降低,细胞毒性试验吸光度值下降,并有明显的剂量-反应关系.对-壬基酚对肢芽细胞的50%增殖抑制浓度(IP50)和50%分化抑制浓度(IP50)分别为15.85 mg/L和11.86 mg/L,IP50/ID50=1.34.结论按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准,对-壬基酚属于阳性致畸物,对大鼠胚胎肢芽细胞的分化和增殖均有特异性抑制作用.
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肢芽细胞微团培养评价饮水中有机物致畸性
目的应用大鼠肢芽细胞微团培养技术快速评价饮用水中有机物的致畸性,并比较氯化消毒过程对致畸作用的影响.方法XAD-4树脂富集、浓缩饮用水中有机物,连续5 d微团培养d13大鼠肢芽细胞,根据半数分化抑制浓度(ID50)和半数增殖抑制浓度(IP50)及IP50/ID50比值判定有机浓集物的致畸性.结果在较低剂量范围内,管网末梢水中有机物对大鼠肢芽细胞的分化有明显的抑制作用,ID50分别为363.1 ml/ml(-S9)和5.67 ml/ml(+S9);IP50分别为1355.2 ml/ml(-S9)和1264.5 ml/ml(+S9),IP50/ID50=3.7(-S9);IP50/ID50=223(+S9),显示该组分特异性抑制肢芽细胞的分化,经代谢转化后其ID50降低达63倍;原水中有机浓集物的ID50分别为1.17 ml/ml(-S9)和0.387 ml/ml(+S9);IP50分别为15.8 ml/ml(-S9)和41.1 ml/ml(+S9);IP50/ID50=13.5(-S9);IP50/ID50=106.2(+S9),代谢活化增加该组分的抑制分化作用.结论管网末梢水及原水中有机浓集物属特异性细胞分化抑制物,具有潜在的直接和间接致畸性,为潜在的强致畸原,显示多种致畸机制.氯化消毒过程可能增加饮用水中有机物的间接致畸作用.
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稳恒磁场对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响
利用大鼠胚胎肢芽细胞进行原代培养,培养物经不同强度的稳恒磁场作用,研究稳恒磁场对增殖和分化的影响,并利用图象分析细胞形态的变化.结果显示强度大于40mT的稳恒磁场能明显抑制肢芽细胞增殖和分化,集落形成率明显减少,并显示剂量效应关系.拟合细胞分化和增殖抑制曲线,计算得大鼠胚胎肢芽细胞半数分化抑制强度(ICD50)为52mT,半数存活抑制强度(ICV50)为40mT.表明抑制细胞分化、增殖可能是稳恒磁场致发育危害的重要作用.
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补肾活血方含药血清对小鼠肢芽细胞增殖和分化的影响
目的 探讨补肾活血方对小鼠肢芽细胞向软骨细胞分化增殖的影响.方法 分离12.5天小鼠胚胎肢芽细胞进行微团培养,同时用补肾活血方含药血清进行干预.采用MTT法检测肢芽细胞的增殖活性,阿尔新蓝染色检测肢芽细胞分化为软骨细胞能力,RT-PCR法检测肢芽细胞中Col2a1、Col10al、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平.结果 与空白对照组比较,补肾活血方含药血清组在24 h、48 h和72h3个时间点均能显著促进小鼠肢芽细胞增殖.微团培养6d后,阿尔新蓝染色结果显示补肾活血方含药血清组软骨细胞集落形成增加.RT-PCR结果显示补肾活血方含药血清组肢芽细胞Col2al mRNA表达水平增加,而Coll0al、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA表达下调.结论 补肾活血方含药血清可能通过β-catenin信号通路促进小鼠胚胎肢芽细胞的增殖与分化.
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菟丝子含药血清对大鼠肢芽细胞、骨形成蛋白2及Ⅱ型胶原表达的影响
目的 探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖与分化、细胞中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA表达、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用中药血清药理学方法制备高、中、低剂量(40、20、10 g/kg)菟丝子含药血清和正常血清.取E15后肢芽制成细胞悬液,接种到细胞培养板中,分别加入高、中、低剂量菟丝子含药血清和正常血清,作为高、中、低剂量组和阴性对照组.体外培养72 h,MTr法检测肢芽细胞的增殖,阿利新蓝染色检测肢芽细胞的分化,RT-PCR法检测肢芽细胞中BMP-2、Ⅱ型胶原mRNA的表达,Western blotting检测Ⅱ型胶原蛋白的表达.结果 低、中剂量组细胞增殖较快,吸光度值高于阴性对照组(P＜0.05);中剂量组软骨细胞集落数多于阴性对照组(P＜0.05),高剂量组软骨细胞集落数低于阴性对照组(P＜0.05);低、中剂量组BMP-2 mRNA表达水平高于阴性对照组(P＜0.05),高剂量组BMP-2 mRNA低于阴性对照组(P＜0.05);各剂量组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均高于阴性对照组(P＜0.05).结论 不同剂量菟丝子含药血清均可促进肢芽细胞的增殖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达;高剂量菟丝子含药血清可下调BMP-2 mRNA的表达水平,抑制肢芽细胞的分化.
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氯化三丁基锡对小鼠肢芽细胞遗传毒性的实验研究
目的 了解环境污染物氯化三丁基锡(TBTCl)对小鼠胚胎肢芽细胞的遗传毒性.方法 将孕12d昆明种小鼠颈椎脱臼处死,分离胚胎,切取肢牙,剪碎,0.125%胰酶消化,用无血清的Ham's F12基础培养基将其制成单细胞悬液.加入不同浓度的TBTCl,使其终浓度分别为:0、0.1、0.2、0.4、0.8mg/L.37.5℃恒温孵育2 h,取细胞悬液做彗星实验.结果 TBTCl染毒组随染毒剂量的浓度的增高,肢芽细胞彗星拖尾率和尾长分别从对照组的4.0%和(9.7±4.3)μm升到0.8 mg/L TBTCl组的61.7%和(26.9±12.5)μm,呈明显的剂量-反应(效应)关系.结论 TBTCl能损伤昆明种小鼠胚胎肢芽细胞DNA,具有遗传毒性.
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锌对小鼠胚胎肢芽细胞分化和增殖的影响
目的观察锌缺乏与锌过量对小鼠胚胎肢芽细胞分化的影响及其毒性作用.方法取12天龄昆明种小鼠胚胎的肢芽,应用微团培养技术,观察不同剂量的锌对肢芽细胞分化和增殖的影响.结果培养基中锌缺乏时或者培养基锌浓度达42 μmol/L时,均可明显抑制细胞分化和增殖(P《0.01).当培养基锌浓度为21 μmol/L或28 μmol/L时,对肢芽细胞分化和增殖均具有明显的促进作用,而锌浓度达35 μmol/L时,对细胞分化的促进作用转化为抑制作用但不影响细胞的存活.结论体外实验条件下,锌对小鼠胚胎肢芽细胞的分化和增殖表现为促进和抑制双重作用;缺锌及过量锌均可抑制细胞的分化并产生毒性作用.
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甲醛、甲苯和二甲苯对SD大鼠胚胎肢芽细胞的联合毒性作用
目的 研究3种主要挥发性有机化合物(VOCs)甲醛、甲苯和二甲苯对SD大鼠胚胎肢芽细胞的联合毒性作用.方法 将肢芽细胞分别暴露于不同浓度的甲醛、甲苯和二甲苯及3种挥发性有机化合物的混合溶液中.采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTF)法分别检测对肢芽细胞的半数抑制浓度(IC50).结果 作用5 d后,甲醛、甲苯和二甲苯对肢芽细胞的IC50分别为10.41、45.58、37.12 mg/L,3种物质混合液的IC50为26.51.Q值为1.07.结论 甲醛、甲苯和二甲苯均有明显的细胞毒性,3种物质的联合毒性类型为相加作用.
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亚硒酸钠对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响
目的探讨亚硒酸钠对大鼠胚胎的致畸性.方法采用胚胎肢芽细胞培养方法,观察亚硒酸钠对大白鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响.结果试验显示亚硒酸钠对大鼠肢芽细胞半数抑制分化浓度(ID50)为10.92 μmol/L,半数抑制细胞增殖浓度(IP50)为7.95 μmol/L.结论亚硒酸钠的IP50/ID50值为0.728(＜6),表明亚硒酸钠只是一种细胞毒性物质,而非致畸物.
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硫酸铝钾对胎鼠肢芽细胞增殖和分化的影响
目的 研究硫酸铝钾对胎鼠肢芽细胞的增殖和分化的影响.方法 应用微团培养法探讨不同浓度铝(0～100 μmol/L)对体外培养的小鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响.结果 铝对肢芽细胞的50%增殖抑制浓度(IP50)和50%分化抑制浓度(ID50)分别为45.97和3.60 μmol/L,IP50/ID50值为12.8,并有明显的剂量―反应关系.结论 硫酸铝钾对胎鼠肢芽细胞的增殖和分化可能有抑制作用.
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平移计数法在微团培养技术中的应用
背景与目的:探索一种经济、快速而又准确的计数方法,以应用于微团培养技术中集落的评价.材料与方法:采用5 d连续培养妊娠13 d的大鼠胚胎中脑及肢芽细胞后,以倒置显微镜视场直径为间距将微团划分为若干等间距平行区间,沿一定方向移动视场并依次计数各区间内集落数,通过摄像分析和批内重复实验评价方法的准确度及灵敏度.结果:各组数据经Grubbs检验法检验均为正常数据,中脑细胞集落数和肢芽细胞集落数的相对误差分别为0.776%、0.213%;批内标准差分别为0.933 9、2.883 9;批内变异系数分别为1.24%、2.05%,均小于WHO提出的OCV(3%)标准.结论:平移记数法无需特殊设备,不仅具有较好的准确度和极高的灵敏度,而且适用于即时分析,从而缩短实验周期,可以作为微团培养技术中集落计数的常规方法.
