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迷走神经结状神经节与心肌细胞联合培养的动态观察
目的 探讨迷走神经结状神经节与心肌细胞之间的联系与作用方式.方法 体外联合培养心肌细胞与迷走神经结状神经节,采用相差显微镜观察两者联合培养不同时间的活细胞生长状况.结果 联合培养24～48 h,可见结状神经节组织块周围有神经元迁出,组织块长出的神经纤维呈放射状向四周延伸.联合培养72～96 h,得到具有选择性结状神经节神经元支配的心神经纤维在单层分散的心肌细胞表而相互交织成网状,并可见有神经终末终止于分散培养的心肌细胞的表面.联合培养7 d后,单纯培养心肌细胞逐渐停止搏动并变性、死亡,而联合培养中心肌细胞仍搏动良好.结论 联合培养的心肌细胞诱导了结状神经节神经元的迁移,并且神经元与心肌细胞之间可能通过神经-肌肉接头的方式进行联系.
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IL-1Ⅰ型受体在大鼠结状神经节及迷走旁节中的表达
为研究迷走神经感受和传递免疫信息的机制,用免疫组织化学方法研究了IL-1Ⅰ型受体在正常和免疫激活的大鼠结状神经节和迷走旁节中的表达.结果表明,正常大鼠结状神经节和迷走旁节中均存在IL-1Ⅰ型受体样免疫反应阳性的神经元,结状神经节中阳性神经元以中、小细胞为主;迷走旁节中几乎所有的细胞均呈IL-1Ⅰ型受体样免疫阳性.细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后结状神经节和迷走旁节中阳性细胞数量未见明显变化.本文结果为迷走神经的初级内脏感觉神经元和迷走旁节可直接感受IL-1刺激的学说提供了形态学基础.
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功能性ghrelin受体在内脏迷走和脊髓传入神经通路中的表达
本文在mRNA和蛋白水平观察了功能性ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor type la,GHS-Rla)在大鼠内脏迷走及脊髓传入神经通路中的表达.结果显示:(1)GHS-Rla免疫反应阳性神经元及GHS-Rla mRNA分布于背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)及结状神经节(nodose ganglion,NG).(2)应用免疫双标技术观察到DRG和NG中都有一些GHS-Rla免疫反应阳性神经元,同时降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色呈阳性,显示GHS-Rla和CGRP共存于同一神经元,表明内脏传入神经元存在许多亚核群.(3)应用荧光金(fluorogold)标记的神经逆行追踪技术对从胃投射到DRG和NG的神经元进行免疫组织化学染色,观察到一些表达CGRP的GHS-Rla免疫反应阳性神经元也被荧光金染色.上述实验结果证实了GHS-Rla在迷走神经和脊髓传入神经元中的表达,提示ghrelin参与了胃.脑轴的调节.
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脂多糖通过诱导白细胞介素-1的生成引起迷走传入神经活动
为探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起迷走传入神经活动是否可能通过白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)的作用,将Wistar大鼠随机分为LPS实验组和生理盐水对照组,用免疫组织化学方法检测迷走神经结状神经节c-Fos及CD14的表达以及腹腔迷走神经周围Mac-1阳性巨噬细胞(macrophage,Mφ).用L929细胞增殖法检测LPS刺激Mφ上清IL-1的生物活性.用原位杂交的方法检测迷走神经结状神经节Ⅰ型白细胞介素-1受体(IL-1RⅠ)mRNA的表达.结果显示,LPS组迷走神经结状神经节神经元c-Fos蛋白表达为阳性,而对照组迷走神经结状神经节神经元 c-Fos蛋白表达为阴性.LPS注射后1 h,见腹腔迷走神经周围Mφ数量明显增多.Mφ在LPS刺激后45 min、 1 h和2 h时,IL-1生成明显增高.LPS组迷走神经结状神经节IL-1RⅠmRNA表达为阳性.以上结果提示,LPS引起迷走传入神经活动可能通过IL-1的作用.
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七氟醚抑制培养鼠迷走传人神经元5-羟色胺3受体调控的电流
目的与方法：采用膜片钳全细胞记录技术，观察0．7、1．4mM七氟醚对培养鼠结状神经节细胞30μM二甲5-羟色胺引发的瞬间内向电流影响，并与氟烷、异氟醚作比较。结果：0．7、1．4mM七氟醚分别抑制5-羟色胺3受体调控的瞬间内向电流的峰值至对照值的77％±12％和64％±9％。但氟烷、异氟醚均增强该电流。结论：结果提示临床麻醉浓度的七氟醚抑制鼠迷走传入神经元5-羟色胺3受体调控的瞬间内向电流。
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Ghrelin与胰岛素抵抗的研究进展
胰岛素抵抗(又称胰岛素敏感性受损,IR)发生在众多疾病中,如肥胖症,非胰岛素依赖型糖尿病,多囊卵巢综合征(P COS)和代谢综合征(MS)等,IR也是缺血性心脏病和心肌梗死的危险因素[1].Ghrelin是28氨基酸多肽,是从胃组织中分离出的一种生长素释放肽[2],在十二指肠、空肠、直肠和结肠中也有发现.胃是胃饥饿素生成的主要器官,其每克组织合成激素的水平是第二大胃饥饿素来源,是十二指肠的10倍多[3].
关键词： Ghrelin 胰岛素抵抗 乙酰基Ghrelin 结状神经节 -
大鼠内吗啡肽2和μ阿片受体参与内脏感觉和运动调控的形态学证据
目的:寻找内吗啡肽2(EM2)和μ阿片受体(MOR)在内脏感觉和运动调控过程中发挥作用的形态学证据.方法:(1)麦芽糖凝集素(WGA)示踪与免疫荧光组织化学染色技术相结合的多重标记方法;(2)用稀盐酸刺激胃,制作内脏痛动物模型;(3)免疫荧光组织化学多重染色方法.结果:(1)将WGA注入大鼠胃壁,在结状神经节(NG)内可见WGA标记神经元和WGA/EM2/MOR三标神经元;在孤束核(NTS)可见WGA跨节标记的纤维和终末以及WGA/EM2/MOR三标纤维和终末;在迷走神经运动背核(DMV)可见WGA逆标神经元和WGA/MOR双标神经元及其与EM2阳性纤维或终末形成的紧密接触.(2)将稀盐酸注入胃后,NG和NTS神经元内的FOS表达明显增多;在NG内可见EM2/FOS双标神经元;在NTS内可见EM2阳性纤维和终末与SP受体/FOS双标神经元形成紧密接触.结论:EM2和MOR可能影响内脏感觉和运动功能.
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VR1与CGRP和IB4在大鼠结状神经节和岩神经节内的共存
应用免疫荧光组织化学三标方法结合激光共聚焦显微镜技术研究了辣椒素受体(VR1)在大鼠舌咽神经和迷走神经内脏感觉神经节-结状神经节(NG)和岩神经节(PG)内的表达,以及与降钙素基因相关肽(CGRP)、植物凝集素(IB4)的共存.结果显示:VR1在NG和PG内中、小型神经元胞体和神经纤维存在广泛的表达.许多VR1阳性神经元呈IB4阳性或与CGRP共存.在NG,CGRP阳性神经元数量较少,约有71.4%±3.8%VR1阳性神经元与IB4共存,只有7.1%±1.2%VR1阳性细胞与CGRP共存.PG内CGRP阳性神经元胞体数量较多,有55.7%±3.1%VR1阳性神经元与IB4共存;有38.7%±2.7%VR1阳性细胞同时呈CGRP阳性.两个神经节内IB4/CGRP双标神经元或VR1/CGRP/IB4三标神经元数量稀少.上述结果提示舌咽神经和迷走神经内脏感觉神经节内存在VR1/IB4和VR1/CGRP两种不同的与伤害性刺激相关的VRI阳性神经元亚群.
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结状神经节与心肌细胞联合培养中神经元的迁移以及肽类神经递质的合成
为了观察结状神经节与心肌细胞联合培养中神经元的迁移和肽类神经递质的合成,我们建立了Wistar大鼠迷走神经结状神经节与心肌细胞联合培养的模型.用倒置相差显微镜观察了结状神经节与心肌细胞联合培养不同时间的活细胞生长情况.用Holmes还原银染色法观察了联合培养72 h和96 h的标本中神经元和心肌细胞的生长以及神经元的迁移.用免疫组织化学法观察了联合培养72 h和96 h的标本中肽类神经递质-P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的合成.结果表明,结状神经节与心肌细胞联合培养中,神经元在形态学上的发育成熟可能需要72 h就可以完成,而神经递质合成的发育成熟则需要96 h.神经元在形态学上的发育成熟并不能代表神经递质合成的发育已经完成.
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实验性哮喘豚鼠内脏感觉传入部位SP免疫反应的研究
用免疫组织化学方法结合显微图像分析,观察哮喘豚鼠脊神经节、结状神经节、脊髓和孤束核内P物质的变化.正常豚鼠C7～T5脊神经节及结状神经节内存在SP阳性反应细胞,其细胞质内充满棕色阳性反应颗粒,并可见大量的阳性反应纤维.P物质免疫反应也见于C7～T5脊髓后角板层Ⅰ、板层Ⅱ、中间带外侧核,呈点状分布,偶见阳性纤维.孤束核内可见大量的P物质阳性反应.哮喘豚鼠结状神经节、C7～T5脊神经节和相应节段脊髓后角、孤束核内P物质阳性反应的密度明显增多而平均灰度值却明显地低于对照组.上述结果表明,哮喘豚鼠内脏感觉传人部位P物质表达增强,提示这些部位的P物质可能参与哮喘的发病过程.
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降钙素基因相关肽在哮喘豚鼠内脏传入系统的定量分析
本文应用放射免疫分析方法研究了实验性哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统内降钙素基因相关肽含量的变化,藉以探讨降钙素基因相关肽在哮喘发病时的作用机制.结果表明,哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统(结状神经节、C7～T5节段脊神经节和脊髓后角、孤束核等处)中的降钙素基因相关肽含量明显高于各对照组(P＜0.05).本研究提示,下呼吸道和肺的内脏传入成分中的降钙素基因相关肽可能参与哮喘发病的病理生理过程.
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青蒿素对C型结状神经节神经元动作电位的影响
目的:研究青蒿素(Art)对结状神经节神经元动作电位(AP)的影响,以明确其抗心律失常和麻醉作用的机制.方法:选择新生和成年SD大鼠制备分离神经元和结状神经节-迷走神经切片标本.全细胞膜片箝方法记录AP,切片标本测量感觉传入纤维的传导速率(CV).并以氯胺酮为参照评价Art对AP和CV的作用.结果:Art的作用如下:1)AP除极过程减慢,静息膜电位(RMP)不变,AP幅度和除极速度明显降低(P＜0.01).2)动作电位复极化中点(APD50)持续时间延长(P＜0.01).3)AP复极过程减慢,复极速度降低,AP超极化程度减弱.4)AP的内向和外向电流明显减小. 5)Art不影响CV.6)对AP的影响呈剂量依赖性,并与氯胺酮的作用相似.结论:Art抑制AP的除极和复极过程,此作用可能至少与其阻断Na+和K+通道的作用有关.
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用膜片箝技术比较大鼠分离细胞和完整结状神经节的动作电位
AIM: To differentiate the electrophysiological characteristics of somatic action potentials (AP) from isolated Neo and Juv nodose sensory neurons (NSN) and those from slices of intact Juv and adult rat nodose ganglia.METHODS: For isolated cell recordings nodose ganglia from 3- 8 d old Neo and 4 weeks old Juv rats were dissociated using trypsin and collagenase, respectively.Nodose ganglia slices with attached vagus were prepared using a sequential treatment of collagenase and trypsin for both Juv and adult rats. Conduction velocity (CV) was collected by vagal stimulation. Whole-cell patch was applied for somatic AP recordings. RESULTS: (1)281 NSN from both isolated cells and nodose slices were studied. Across all age groups, there was no difference observed among either C- or A-types. The difference between C- and A-type was significant. (2) Neurons exhibiting AP with prominent repolarization hump,broader APD50 ( ＞ 2.0 ms), upstroke velocity at the point of APD50(UVAPD50) and downstroke velocity at the point of APD50(DVAPD50) below 100 V@s-1 and 50 V@s-1 were classified as C-type ( n = 222). Those without a hump,brief APD50 ( ＜ 1.0 ms), and UVAPD50 and DVAPD50greater than 200 V@s-1 and 100 V@s-1 were classified as A-type ( n = 59). (3) With slices, except for hump,APD, UV, and DV, significant differences were also observed (C- vs A-type) in CV from both Juv (0.56±0.15 vs 15.6 m@s-1) and adult (0.9±0.4 vs 14.5±1.0 m@ s- 1 ) nodose slices, discharge rate ( single or burst vs repetitive), and frequency follow ( ＜20 Hz vs ＞ 100Hz). (4) Phase analysis showed that C-type had higher AP firing threshold, and lower total in- and outward peak currents than A-type. CONCLUSION: C- and A-type AP from isolated NSN of Neo or Juv rats exhibited electrophysiological characteristics that closely followed those of AP recorded in nodose slices. Therefore,isolated NSN can effectively serve as an experimental surrogate for electrophysiological studies of NSN requiring prior identification of afferent fiber type. Features of the AP waveform such as the repolarization hump, APD50,and UV are strongly correlated with CV and are therefore reliable measures for classifying isolated NSN as either C- or A-type. It is most important that the nodose slice enables us to study the AP and ion channel characteristics on identified NSN by afferent fiber CV with adult animals.
