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洛铂诱导胆管癌RBE细胞F-肌动蛋白和α-微管蛋白骨架改变
目的 观察洛铂对人胆管癌RBE细胞微丝F-肌动蛋白(F-actin)和α-微管蛋白(α-tubulin)作用.方法 体外培养胆管癌RBE细胞,分别用不同剂量洛铂处理,鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)双染后激光共聚焦显微镜观察微丝蛋白F-actin结构变化,免疫组织化学染色观察α-tubulin结构变化,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测α-tubulin mRNA转录水平变化.结果 激光共聚焦显微镜及免疫组织化学染色法观察到洛铂作用下,胆管癌RBE细胞微丝蛋白F-actin与微管蛋白α-tubulin均发生解聚和重排,而α-tubulin染色加深(P＜0.05),α-tubulin mRNA/β-actin结果:5.0 mg/L组:2.08 ±0.13;25.0 mg/L组:1.91±0.46(P ＜0.05),证实洛铂使胆管癌RBE细胞α-tubulin转录水平增加.结论 微丝、微管的解聚和重排在洛铂对胆管癌RBE细胞诱导凋亡过程中起重要作用.
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热疗联合人肿瘤坏死因子对TNFR1高表达胶质瘤的细胞周期、F-肌动蛋白及其侵袭性的影响
目的 探讨热疗联合重组人肿瘤坏死因子(recombinant human tumor necrosis factor,rhTNF)对肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)高表达的胶质瘤细胞的细胞周期和F-肌动蛋白(F-actin)的影响及其与胶质瘤侵袭性的关系.方法 建立TNFR1高表达胶质瘤细胞株,RT-PCR和Western blot法检测胶质瘤细胞TNFR1的表达水平；碘化丙啶染色后用流式细胞术检测胶质瘤细胞细胞周期的变化；WST-8法检测细胞增殖；免疫荧光技术检测胶质瘤细胞内F-actin的表达水平；Transwell小室法检测胶质瘤细胞侵袭性改变.结果 与对照组相比,TNFR1高表达胶质瘤细胞株的TNFR1 mRNA水平增加了78.5％,其蛋白质的表达水平增加了89.7％(P＜0.05)；经热疗联合rhT-NF处理后细胞增殖受抑制,S和G2/M期的TNFR1高表达胶质瘤细胞数之和明显增多,而F-actin的荧光强度和胶质瘤侵袭性分别降低了72.3％和83.10％.结论 热疗联合rhTNF可能是通过阻滞TNFR1高表达胶质瘤细胞的细胞周期和降低F-actin的表达来实现降低胶质瘤侵袭性的作用.
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豚鼠耳蜗微血管内皮细胞通透性分子调控机制的初步研究
目的: 探讨豚鼠耳蜗微血管内皮细胞通透性的分子调控机制.方法:使用体外培养的豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞,建立耳蜗微血管内皮细胞通透性调控的体外模型;用霍乱毒素(CT)和速尿作为处理因素,检测其对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞环磷酸腺苷(cAMP)和F-肌动蛋白(F-actin)含量的影响,以及对牛血清白蛋白和伊文氏兰通透率的影响.结果:CT能使豚鼠耳蜗微血管内皮细胞cAMP的含量显著增加(P<0.01),F-actin的含量显著减少(P<0.05),且核周F-actin减少尤为明显,使牛血清白蛋白和伊文氏兰的通透率显著降低(均P<0.01);相反,速尿能使耳蜗微血管内皮细胞cAMP的含量显著减少(P<0.01),F-actin的含量显著增加(P<0.01),且核周F-actin增多尤为明显,使牛血清白蛋白和伊文氏兰的通透率显著增高(P<0.01和P<0.05).结论:cAMP是体外耳蜗血管纹微血管内皮通透性调控的主要分子机制之一.耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性的改变与内皮细胞形状的改变及肌动蛋白丝在内皮细胞中的分布和含量的变化有关.
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水杉总黄酮对大鼠血小板聚集、变形功能的抑制作用
目的:观察水杉总黄酮(FMG)对大鼠血小板聚集、变形功能的影响.方法:比浊法测定大鼠血小板聚集活性,SDS-PAGE分离F-肌动蛋白,放免法测定血小板TXB2和血浆6-酮-PGF1α的含量.结果:FMG抑制大鼠血小板聚集活性,降低F-肌动蛋白含量,抑制血小板TXB2生成,升高血浆6-酮-P1GF1α含量.结论:FMG能抑制大鼠血小板聚集和变形,其机制可能与干扰血小板信号转导通路中的花生四烯酸代谢途径有关.
关键词： 水杉总黄酮 血小板聚集 F-肌动蛋白 血栓素B2 6-酮-前列腺素F1α -
外周血单核细胞F－肌动蛋白α亚基作为鼻咽癌标志物的探索
目的：对比 F－肌动蛋白α亚基（CAPZA1）在不同家族史的鼻咽癌患者外周血单核细胞中的表达，以探究外周血单核细胞CAPZA1是否可以作为鼻咽癌潜在标记物。方法：选取鼻咽癌高癌家系癌气虚体质患者（观察一组）9例、散发鼻咽癌气虚体质患者（观察二组）9例、健康人（对照组）9例。应用RT－PCR、Western blot方法检测CAPZA1在各组患者外周血单核细胞中的基因及蛋白表达量情况。结果：观察一组、观察二组、对照组 RT－PCR 的2－△△Ct值分别是0．78±0．11、0．77±0．14、0．99±0．28，各组单核细胞基因表达量无明显差异（P ＞0．05）。观察一组、观察二组、对照组Western blot的OD值分别为0．68±0．09、0．92±0．09、1．30±0．05，观察组明显低于对照组（P ＜0．05），观察一组低于观察二组。结论：CAPZA1低表达可能是高癌家系鼻咽癌高发的其中一个原因，外周血单核细胞CAPZA1可作为鼻咽癌的其中一种生物标志物。
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葫芦素E对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响及其作用机制
目的 研究葫芦素E(CuE)对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响,并探讨CuE作用的分子机制.方法 用0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L的CuE分别处理培养的Caco-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕实验及Transwell小室细胞跨膜实验检测细胞迁移能力,荧光法检测细胞F-actin与G-actin相对含量,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架F-actin,Western blot分别检测cofilin、p-cofilin、LIMK2及p-LIMK2蛋白表达.结果 CCK-8法、划痕实验与Transwell跨膜实验显示:0.1、1、10 μmol/L的CuE对Caco-2细胞的增殖与迁移均具有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现出剂量与时间依赖性;荧光法表明0.1 μmol/L的CuE能增加Caco-2细胞G-actin含量(P＜0.05),引起F-actin/G-actin的动态平衡失调,并在0.1μmol/L的CuE处理1、2、6、12、24 h后,对细胞骨架F-actin有明显的破坏作用,Western blot检测显示,不同浓度CuE处理Caco-2细胞后,cofilin、p-cofilin及p-LIMK2的蛋白表达明显降低(P＜0.05),而LIMK2表达与对照组比较无明显差异.结论 CuE可能通过抑制LIMK/cofilin信号通路而损害细胞骨架actin,从而导致结肠癌Caco-2细胞的增殖与迁移受到抑制.
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流体切应力下IL-8对中性粒细胞的作用
目的考察中性粒细胞在不同类型流场中对IL-8的各种响应强度变化及其相互关系.方法采用IL-8和稳定剪切流或正弦振荡剪切流同时对中性粒细胞作用1分钟后,用流式细胞术测定中性粒细胞CD18,CD62L表达和F-actin含量;以荧光染料Fura2/AM标记细胞内游离钙离子([Ca2+]i),用荧光分光光度计测定[Ca2+]i.结果流体切应力能较大程度地影响IL-8作用下中性粒细胞表面粘附分子的表达,CD18升高,CD62L大幅度脱落,这一变化与切应力的大小、型式等没有明显的关系;另一方面,流体场中IL-8作用的中性粒细胞内F-actin含量随切变率的升高而迅速下降,继而回升,在切变率达600s-1时,已回复到无切应力时的对照水平;[Ca2+]i在IL-8和流体切应力的双重作用下先大幅下降,而后迅速回升到对照水平.结论流体切应力在很大程度上影响了IL-8对中性粒细胞的激活作用,调节了中性粒细胞的反应强度.细胞内游离钙离子浓度的变化敏感,变化幅度大,这与其第二信使作用相符合.
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流体剪切力和细胞骨架阻断对肌动蛋白丝的影响
目的:探讨流体剪切力对成骨细胞细胞骨架的影响.方法:实验分为3组,Ⅰ组(流体剪切力),Ⅱ组(流体剪切力+细胞松弛素D,CytochalasinD),Ⅲ组(流体剪切力+噻氨酯哒唑,Nocedazole).分别对Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组施加12 dyne/cm2流体剪应力,应力作用时间分别为:0,10,30,60 min.采用激光共聚焦显微镜、免疫荧光显微镜技术和免疫荧光染色方法对小鼠成骨细胞骨架进行形态学观察、F-肌动蛋白表达的荧光定量分析.结果:细胞在不同时间点受到同一剪切应力后,细胞的排列方向发生改变,细胞内的F-肌动蛋白排列同应力方向一致,随着应力时间延长到1 h,F-肌动蛋白变得厚而丰富,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比明显增强(P<0.01).当加入细胞松驰素D后,细胞内F-肌动蛋白结构发生改变,在力的作用下,细胞内微丝断裂明显,随着拉伸时间的延长,微丝断裂更为明显,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比显著减弱(P<0.01).加入噻氨酯哒唑后,在剪切力作用下细胞内微管断裂,F-肌动蛋白丝完整且边缘呈锯齿状改变,它的荧光强度同0时段剪切力组相比也有明显减弱(P<0.05).结论:不同时间点受到同一剪切应力对细胞骨架微丝、微管结构产生一定的影响,微丝解聚和重排以及微管断裂与否在细胞力传导中起重要作用.
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鸟苷酸交换因子SWAP-70的研究分析
SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一，初发现与B细胞活化及与免疫球蛋白重链类型转换相关，随着研究的深入，进一步发现SWAP-70在多种组织细胞中均有表达并参与细胞骨架的重排，细胞信号的转导，变态反应的调节及肿瘤的发生发展等多种生理病理过程。因此，有关SWAP-70蛋白的表达情况及作用机制的深入研究有可能成为今后变态反应和肿瘤生物治疗的热点。
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激光共聚焦扫描显微镜检测缺氧人肺微血管内皮细胞丝状肌动蛋白的变化
目的 研究人肺微血管内皮细胞丝状肌动蛋白(F-actin)在缺氧前后的变化,探讨在血管内皮细胞水平研究新生儿肺出血机制的方法.方法 人肺微血管内皮细胞常规培养,分为对照组和1、2、4、6、12 h和24h缺氧培养组,每组设8个复孔,异硫酸氢荧光素—鬼笔环肽与胞浆内F-actin结合而发出红色荧光,共聚焦显微镜扫描观察F-actin的变化情况并记录相应荧光值.结果 缺氧Ⅰh组F-actin平均荧光强度明显降低,为对照组的66.3％±5.3％,差异有统计学意义(P＜0.05),缺氧24 h F-actin含量下降至对照组的47.1％±6.9％.缺氧后,细胞变得狭长,细长的丝状伪足明显可见,核周F-actin的分布明显减少,皮质状结构消失,应力纤维排列紊乱或部分消失,随着缺氧时间的延长F-actin逐渐解聚断裂.结论 通过观察缺氧前后肺血管内皮细胞F-actin变化,可以为在内皮细胞水平研究新生儿肺出血发病机制提供实验研究基础.
