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CARM1维持羊水干细胞干性的机制
背景：研究表明，CARM1催化的组蛋白H3R17/R26的甲基化修饰对于胚胎干细胞干性的维持起着非常重要的作用，但其在羊水干细胞干性维持中的作用及机制目前尚不明确。
目的：初步探讨CARM1在维持羊水干细胞干性中的作用及其分子机制。
方法：分离、培养人妊娠晚期羊水干细胞，RT-PCR鉴定干细胞标志物及CARM1基因的表达。利用CARM1的两条shRNA慢病毒表达载体，沉默羊水干细胞中CARM1基因的表达。RT-qPCR检测CARM1基因的表达沉默效率，Western blot检测组蛋白H3R17的甲基化水平。RT-qPCR检测干细胞标志物OCT4，SOX2和NANOG基因的表达水平。
结果与结论：①人妊娠晚期羊水干细胞能够表达干细胞标志物，包括OCT4、SOX2、Nanog和KLF4，并表达CARM1基因；②CARM1的两条shRNA均能够有效沉默CARM1基因的表达；③CARM1表达沉默后，羊水干细胞中组蛋白H3R17的甲基化水平降低，OCT4和SOX2的表达也降低，而NANOG的表达没有发生变化；④结果表明，CARM1可能通过调控OCT4和SOX2基因的表达，进而起到维持羊水干细胞干性的作用。 -
银屑病中miRNA的研究进展
银屑病是一种慢性的炎症性皮肤病,其与遗传、免疫和感染等多种因素相关.在组织病理上以表皮角质形成细胞增殖加速、细胞分裂周期和表皮更替时间缩短为重要特点.miRNA属于一类长约19～24个核苷酸的非编码RNA,并广泛存在于从细菌、真菌到人类的各生命体中.其通过招募RNA干扰途径中的蛋白组分或与染色体重排相关的蛋白因子到启动子区域抑制翻译,导致表达沉默,从而发挥控制基因表达的作用.近年来MicroRNA(miRNA)对于银屑病诊断治疗的研究越来越受到人们的关注.
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siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究
目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响.方法:通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1a siRNA-FAM,使用Lipofectamine 2000转染试剂盒将ASIC1a siRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR (q-RT-PCR)及Western Blot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1amRNA和蛋白表达的抑制作用.同时采用Annexin-V/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.结果:ASIC1a siRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1a mRNA 表达显著低于对照组(P＜0.01),大抑制率为85.4％；Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P＜0.01).Annexin-V/PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少.结论:siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节ASIC1a的表达有关.
关键词： 关节软骨细胞 酸敏感离子通道(ASICs) 阳离子脂质体 表达沉默 细胞凋亡 -
急性白血病ZO-1基因表达与甲基化调控关系的研究
目的 探讨人急性白血病细胞系与正常骨髓细胞中ZO-1基因启动子区甲基化状态的差异及其与基因表达的关系.方法 应用反转录聚合酶链反应的方法观察3种人白血病细胞株HL60、NK92、Molt4及正常人骨髓有核细胞中ZO-1基因的表达情况;应用甲基化特异性聚合酶链反应的方法分别检测其ZO-1基因启动子区的甲基化状态;应用去甲基化药物处理HL-60细胞,观察处理后ZO-1基因甲基化状态及基因表达的变化.结果 在10例正常骨髓细胞均可发现ZO-1基因表达,而在3种白血病细胞系中未见其表达;正常骨髓细胞中ZO-1基因启动子区无甲基化,而在3种白血病细胞中呈完全甲基化;应用去甲基化药物处理HL-60细胞使其ZO-1基因启动子区去甲基化,可重新诱导ZO-1基因的表达.结论 ZO-1基因的表达受甲基化状态调控,ZO-1基因可能与白血病发生相关.
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SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选
目的:构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株,为研究SLC7A11基因的表达沉默对肝癌发生发展的影响奠定基础.方法:针对SLC7A11基因的不同部位合成3个siRNA的寡核苷酸片段,分别将其克隆到真核表达载体pGPU6/GFP/Neo中.利用脂质体转染法分别将质粒导入肝癌LM3细胞,24小时后观察细胞内GFP表达情况,并通过real-time PCR及Western blot的方法比较各组细胞SLC7 A11基因mRNA和蛋白的表达水平,然后用G418对转染细胞进行筛选培养.结果:经酶切分析及测序验证,成功构建了靶向沉默SLC7A11基因的真核表达质粒pGPU6-SLC7A11-siRNA;通过real-time PCR及Western blot的方法验证,成功筛选出SLC7A 11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株.结论:成功构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株,为进一步研究SLC7A 11基因表达沉默对肝癌细胞发生发展的影响奠定了基础.
