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不同保存液及放置时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响
背景：干细胞制备完成后的放置时间与其存活率的关系是临床应用安全、有效的基础。目的：观察不同保存液及不同保存时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响，为干细胞有效期的确定提供重要依据。方法：选用脐带源间充质干细胞制备干细胞制剂，分别采用生理盐水、培养基、培养基+生理盐水、生理盐水含表皮生长因子、培养基含低分子肝素钙悬浮保存。使用冷藏箱模拟细胞运输条件，分别在第0，6，12，18，24，30，36，42，48小时取样，进行细胞总数和细胞活率的检测。结果与结论：各组在24 h内的细胞数量和细胞活率差别不大。24 h后，培养基组和培养基含低分子肝素钙组的细胞总数和细胞活率优于生理盐水含因子组、生理盐水组、培养基+生理盐水组。干细胞制剂制备完成后，冷藏运输24 h内细胞活率可达90%以上，保存液中的营养成分及合适的pH值，可使细胞活率显著提高。
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稀土氧化钕粉尘对大鼠肺灌洗液中细胞总数变化和蛋白含量的影响
[目的]研究稀土氧化钕粉尘对大鼠肺灌洗液(BALF)中细胞总数和蛋白含量的动态变化. [方法]选用SPF级健康成年雄性SD大鼠195只,体重(200±16)g,采用气管非暴露插管灌注法染尘.不同染毒时间组分别采用100 mg/kg稀土氧化钕粉尘悬液0.8 mL和0.9％生理盐水0.8 mL一次性染尘,分别于第3、7、14、21、28天各处死15只实验组大鼠和10只对照组大鼠;不同剂量组按25、50、100、150 mg/kg剂量0.8 mL一次性染尘,在染毒第28天处死各实验组大鼠15只,对照组处死10只(由于实验组染毒时间均为28d,所以设同一对照组为不同染毒剂量组中实验组对照).取大鼠支气管肺泡灌洗液,用白细胞计数板在显微镜下对细胞总数进行计数.ELISA法分别测定不同染毒时间组和不同染毒剂量组大鼠BALF中上清液和巨噬细胞蛋白的含量. [结果]不同染毒时间组和不同染毒剂量组中实验组大鼠较对照组大鼠BALF中细胞总数均升高(P＜0.05);且在各染毒时间组中细胞总数出现先增加后减少,在第14天达到低值后又呈增加的变化趋势,但均高于对照组(P＜0.05).在不同染毒剂量组中细胞总数随着染毒剂量增加而逐渐增多,细胞总数均高于对照组(P＜0.05).不同染毒时间组中实验组大鼠较对照组大鼠BALF上清和巨噬细胞中的蛋白含量均明显增高(P＜0.01).不同染毒剂量组中实验组大鼠较对照组大鼠BALF上清液和巨噬细胞中的蛋白含量均明显增高(P＜0.01).不同染毒时间组大鼠BALF上清液和巨噬细胞蛋白含量出现先增加后减少,在第14天达到低值后又呈增加的变化趋势,但均高于对照组(P＜0.05).不同染毒剂量组中大鼠BALF上清液和巨噬细胞蛋白含量随着剂量增加而逐渐增多,蛋白含量均高于对照组(P＜0.05). [结论]稀土氧化钕粉尘进入大鼠肺组织后,BALF中细胞总数以及上清液和巨噬细胞中蛋白含量均发生了明显的变化.
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血清对脐带间充质干细胞体外培养的影响
目的 探讨血清对脐带间充质干细胞体外培养的影响.方法 将人脐带间充质干细胞分别培养在不含血清、含灭活血清和含未灭活血清的低糖达尔伯克改良伊格尔培养基(L-DMEM)中.每天用显微镜观察脐带间充质干细胞在3种培养基中的生长情况,并计算细胞总数、统计细胞成活率.结果 脐带间充质干细胞在含未灭活血清的L-DMEM中生长状况好,在不含血清的L-DMEM中生长状况差.结论 含未灭活血清的L-DMEM是脐带间充质干细胞体外培养的佳培养基.
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1727份公共库脐带血的质量分析——附23份库存脐带血干细胞解冻质控分析
目的 评估公共库存脐带血造血干细胞的质量及脐血库用于质控的血样是否能够正确反应实际血袋内的脐带血造血干细胞的活性和数量.方法 分析2009年1月-2010年12月按照Rubinsten标准分离入库保存的1 727例合格脐带血造血干细胞,通过流式细胞术和集落培养法计算造血干细胞数量,血细胞计数仪计数细胞数量、应用气相液氮系统深低温冷冻造血干细胞.分析入库细胞总数(TNC)的影响因素,以及与CD34+总数、集落形成单位(CFU-C)总数的相关性;对冷冻时间＞24个月的23份脐带血造血干细胞解冻后,分析解冻前后血袋、冷冻麦管内和冻存管内的细胞数、CFU-C产率、CD34+百分比、活细胞比率,并推算血袋内TNC、CD34+细胞数、CFU-C总数.结果 1 727份脐带血平均血量为(96.62±20.41) mL,入库TNC、CD34+总数、CFU-C总数分别为(9.88±2.54)× 108个、(2.76±1.85)×106个、(11.05±7.72)×105个,CD34+总数和CFU-C总数与TNC相系数均为0.49,CD34+百分比与CFC产率相关系数为0.80.23份解冻脐带血冷冻前后血袋、冷冻管和冷冻麦管内WBC(×109/L)分别为28.03±8.01、22.55±6.56、20.43±5.23,TNC(×108)为10.74±3.33、58±2.90、7.78±2.28、7.97±2.73、台盼兰拒染率(％)99.0±0、83.04±6.21、78.9±6.56、80.43±6.01 (P ＜0.01);冷冻前和解冻后血袋、冷冻管,冷冻麦管的CFU-C产率(/105)分别为159.9±45.8、149.2±37.4、91.6±35.8、155.0±41.2,冷冻管内CFU-C产率明显下降(P＜0.05);冷冻前和解冻后血袋、冷冻管,冷冻麦管的CFU-C总数(×105)分别为159.9±45.8、149.2±37.4、91.6±35.8、155.0±41.2,解冻后冷冻管内CFU-C总数下降明显(P＜0.05);血袋、冷冻管和麦管内的小细胞数量(×108)分别为3.92±1.40、3.95±1.77、3.86±1.46、4.05±1.52,CD34+总数(×106)为3.23±1.84、3.02±1.88、3.12±1.85、3.62±3.07.结论 公共库入库的1 727份脐带血符合国际通用标准;解冻后检测分析发现,脐带血冷冻后丢失的细胞以成熟的粒细胞为主,冷冻解冻后的脐带血造血干细胞符合临床应用标准.
