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GATA4基因与单纯性先天性心脏病的相关性研究
目的 探讨GATA4基因与单纯性先天性心脏病的相关性.方法 2001年,收集沈阳军区总医院心脏外科62个单纯性先天性心脏病(CHD)家系,选择GATA4基因编码区内4个可引起氨基酸改变的cSNP,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分析该62个单纯性CHD核心家系206名成员的基因型;应用ETDT软件进行单位点关联分析;应用2LD软件进行配对连锁不平衡检验;应用TRANSMIT软件进行单体型分析.结果 Q19E(rs1139240)位点未检测到多态.L39V(rs1139241)、P66A(rs1139244)和G377S(rs3729856)位点存在多态.单位点关联分析显示L39V位点x2=6.178(P＜0.05),P66A位点x2=8.607(P＜0.05),G377S位点x2=9.842(P＜0.05).配对连锁不平衡检验显示L39V和P66A之间存在连锁不平衡(D'=0.999999).单体型分析共观察到4种单体型,只有2种单体型的频率大于3%,但却占单体型总数的97.7%.这两种单体型的总体统计x2=1.0345(P＞0.05).结论 Q19E在本文人群中未检测到多态;L39V、P66A和G377S 3个位点与单纯性CHD有明显的相关性(P＜0.05).
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单纯性先天性心脏病致病基因的研究进展
先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是胎儿时期心血管发育异常而导致的先天性畸形疾病,在新生儿非感染性死亡中占首位.其中约有80%仅表现为心脏畸形,而不伴有其他系统的先天异常,称之为单纯性先天性心脏病.近年来,用分子遗传学的手段来研究单纯性先天性心脏病的分子基础已经取得了较大进展,从而促进了其临床诊断及治疗方法的拓展.
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单纯性先天性心脏病分子遗传学机制
先天性心脏病是一种常见的出生缺陷,是严重危害婴幼儿健康的先天畸形,在新生儿非感染性死亡疾病中占首位,其中约有80%为单纯性先天性心脏病.该病为与环境相关的、某显性主基因参与的多基因遗传性疾病.转录因子的突变是先天性心脏病遗传学方面的主要病因,其中NKX2.5,TBX5,GATA4为单纯性心脏病中3个主要的致病基因.近年来学者们将机体作为一个整体研究认为,许多与机体生长发育、能量代谢、细胞周期、细胞骨架以及细胞黏附、LIM蛋白、锌指蛋白等的相关蛋白基因也可能参与先天性心脏病的发病.
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MEF2C基因启动子区碱基突变对转录活性的影响
目的 研究MEF2C基因启动子突变对其转录活性的影响及其突变可能的致病机制.方法 采用聚合酶链式反应,以对照组基因组DNA为模板,获得野生型MEF2C基因启动子区DNA片段(-939~+531bp)(1470bp);利用分子克隆技术将目的片段连接到含有荧光素酶报告基因的pGL3-Basic载体上,构建野生型MEF2C启动子报告基因载体pGL3-Basic-MEF2C-WT;利用点突变技术,构建突变型MEF2C启动子报告基因载体pGL3-Basic-MEF2C-M1(M1点突变类型:-293插入G突变)、pGL3-Basic-MEF2C-M2(M2点突变类型:-160插入G,C>T突变);采用琼脂糖凝胶电泳、双酶切、基因测序方法验证上述3种载体是否构建成功;利用脂质体瞬时转染技术将pGL3-Basic-MEF2C-WT、pGL3-Basic-MEF2C-M1、pGL3-Basic-MEF2C-M2载体分别体外转染HEK-293T细胞,标记为WT组、M1组、M2组,将pGL3-Basic空载体转染HEK-293T细胞标记为对照组、将相同条件下培养未转染载体的细胞标记为空白组,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测各组相对荧光素酶活性(relative luciferase activity RLA),比较各组载体的转录活性.数据用SPSS18.0软件进行单因素方差分析(ANOVA)处理,运用启动子区生物信息预测软件对各组启动子区序列可能的转录因子结合位点及CpG岛进行预测,并分析比较.结果 成功构建了含野生型、M1型、M2型的MEF2C基因启动子区的荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-MEF2C-WT、pGL3-Basic-MEF2C-M1、pGL3-Basic-MEF2C-M2;空白组、对照组、WT组、M1组、M2组的RLA分别为(0.83±0.35)、(2.28±0.36)、(24.17±0.50)、(29.65±2.40);M1组和M2组的RLA水平高于WT组,分别是野生型的10.6倍、13倍,差异具有统计学意义(P<0.05);转录因子结合位点预测发现正常MEF2C基因启动子片段上-356~-108bp存在13个可能的位点,M1突变导致1个新的转录因子结合位点JCV-repeated-sequence生成,M2突变导致1个新的转录因子结合位点Sp1生成;预测发现正常MEF2C基因启动子片段上存在2个CpG岛,2个突变组预测没有发现CpG岛数目的变化,但位置发生变化.结论 MEF2C基因启动子区M1突变、M2突变均能提高转录活性,这2种突变导致启动子区转录因子结合位点数目、CpG岛位置的改变,这些变化可能与新疆维吾尔族单纯性先天性心脏病的发病机制有关.
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新疆维、汉族单纯性先天性心脏病MTHFR基因
目的 分析亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T(rs1801133)多态性及血浆同型半胱氨酸水平与新疆维、汉族单纯性先天性心脏病发病的关系.方法 采用循环酶法测定228例(105例汉族和123例维吾尔族)单纯性先天性心脏病患者(CHD组)和230例正常体检者(105例汉族和125例维吾尔族)(对照组)血浆同型半胱氨酸浓度,聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对rs1801133基因分型,Sanger核酸测序法验证分型结果 ;并进行统计学分析.结果 新疆维、汉族健康人群血浆同型半胱氨酸水平及基因型频率和等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05);维、汉族CHD组血浆同型半胱氨酸水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CHD组与对照组基因型频率和等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0.05);新疆维、汉族动脉导管未闭、法洛氏四联症患者等位基因频率分布与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 rs1801133多态性可能是新疆地区维、汉族单纯性先天性心脏病的遗传易感因素并且存在民族异质性,其可能通过影响血清同型半胱氨酸水平参与单纯性先天性心脏病的发病及临床表现.
