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CDC25磷酸酶抑制剂研究进展(2008～2014年)
细胞分裂周期蛋白CDC25磷酸酶与细胞周期依赖性蛋白的调控以及细胞增殖密切相关,且在许多肿瘤中过度表达,CDC25磷酸酶已经成为很有前景的癌症治疗靶标.许多结构多样的天然产物及合成小分子化合物被证实是特异性的CDC25磷酸酶和抗肿瘤先导化合物,本文对该领域的研究新进展进行综述.
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CDc25 c在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用
目的：探讨Cdc25c对肝脏缺血再灌注半脘氨酸蛋白酶（Caspase）-3蛋白表达的影响及与肝细胞凋亡的内在联系。方法健康30只SD大鼠随机分为空白对照组（S组）；缺血再灌注＋生理盐水组（I/R组）；pAdEasy-Cdc25c ＋缺血再灌注组（C组），每组10只。 Western印迹方法检测CDc25c、Caspase-3在肝脏组织中的表达；TUNEL 法检测肝细胞凋亡。结果 I/R 组中 Caspase-3的蛋白表达及肝细胞凋亡明显多于 S 组（ P＜0.05）；S和C组中Cdc25c的蛋白表达高于I/R组，而细胞凋亡低于I/R组（P＜0.05）。结论 Cdc25c的表达降低Caspase-3蛋白的表达，抑制肝细胞凋亡，保护缺血再灌注肝损伤。
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外源性人乳头瘤病毒16型E7癌基因导入对HeLa细胞cdc25A表达的影响
目的:研究HPV16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期调节因子cdc25A mRNA表达的影响,探讨E7癌基因和cdc25A在宫颈癌发生发展中的作用.方法:用含有HPV16E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测感染前后HeLa细胞cdc25A mRNA表达的差异.结果:感染后HeLa细胞cdc25A的mRNA含量较感染前显著增加(感染前灰度值0.2306±0.0964,感染后0.8739±0.2188,P＜0.01).结论:HPV16E7癌基因促进细胞周期调节因子cdc25A的表达,可能是宫颈癌发病机制中的重要分子事件.
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以蛋白质磷酸酶CDC25A/B为靶标的抗癌药筛选体系的构建
目的 通过克隆和表达人蛋白质磷酸酶CDC25A/B融合蛋白,探讨构建高通量靶向抗癌药筛选体系的途径.方法 采用RT-PCR技术克隆人CDC25A/B催化区结构域cDNA序列,构建pGEX-4T-1-CDC25A/B原核表达质粒,表达和纯化携带还原型谷胱甘肽(GSH)标签的融合蛋白.以对硝基苯基磷酸盐(pNPP)为底物,在96孔板上建立分别以GST-CDC25A/B为靶标的筛选体系,应用维生素K3(VK3)进行验证性抑制剂筛选.结果 成功表达和纯化了GST-CDC25A/B融合蛋白,建立了相应的高通量磷酸酶抑制剂筛选体系.在相同反应条件下,GSTCDC25B对pNPP的水解活性是GST-CDC25A的6倍.VK3对CDC25A/B的半数抑制浓度(IC50)分别为0.8和1.8μg/ml.结论 通过表达和纯化CDC25A/B催化区结构域与GST的融合蛋白,可以高效率的建立靶酶抑制剂高通量筛选体系,为进一步研发VK3衍生物类新型靶向抗癌药奠定了基础.
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顺铂处理癌细胞后CDC25mRNA剪接异构体的变化
目的：探讨顺铂（ CDDP）对肺癌、宫颈癌细胞和人胚肾细胞CDC25磷酸酶mRNA的选择性剪接的影响。方法：将培养的肺癌A549和H1299细胞，宫颈癌C33A、SiHa、CaSki细胞及人胚肾293FT细胞分为实验组和对照组，实验组细胞用CDDP处理，对照组细胞用DMSO处理，设计CDC25A、CDC25B、CDC25C引物，利用RT-PCR检测CDC25 mRNA 剪接异构体的表达变化。结果：与对照组细胞比较，随着CDDP浓度的增加，肺癌A549和H1299细胞，宫颈癌C33A、SiHa和CaSki细胞以及人胚肾293FT细胞中CDC25B、CDC25C mRNA剪接异构体比例有明显变化，而CDC25A mRNA剪接异构体变化不明显。结论：CDDP引起细胞DNA损伤时，可发生CDC25 mRNA选择性剪接异构体的比例发生变化，这可能与肿瘤药物治疗时的抗性有关。
