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体外快速减肥模型的建立及初步评价
目的 建立一种快速、高效的减肥药物体外筛选模型,并对该模型进行初步评价.方法 用油酸诱导SD大鼠原代成熟脂肪细胞建立肥胖细胞模型,选用阳性药物异丙肾上腺素和已明确有减肥作用的功能因子染料木素、咖啡因及阴性对照物姜黄素对该肥胖模型进行评价.结果 试验所选用的阳性受试物均能显著刺激脂肪细胞发生脂解,而阴性受试物无脂解作用.结论 该模型可以用于减肥药物的体外快速筛选.
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内脏和皮下脂肪组织的异质性探讨
随着肥胖患病率的增加，对白色脂肪组织的研究受到关注。不同部位的白色脂肪组织有功能异质性，特别是内脏和皮下脂肪组织。本文从二者的分布、解剖、功能、影响因素及内分泌功能等方面作一综述。
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乙酰丙酮氧钒化合物诱导的活性氧生成在3T3L1脂肪细胞脂解和糖代谢过程中的调节作用
本研究以分化的3T3L1脂肪细胞为模型,研究了具有抗糖尿病活性的钒化合物VO(acac)2引起的活性氧物种水平升高在3T3L1脂肪细胞脂解和糖代谢过程中的调节作用.共聚焦荧光显微镜的结果显示,在高糖刺激的3T3L1脂肪细胞中,VO(acac)2可引起细胞的ROS水平升高;利用NADPH氧化酶的两种特异性抑制剂可降低此化合物诱导产生的活性氧水平.同时,蛋白免疫印迹的结果显示,ROS水平的下降也可相应降低钒化合物引起的AKT的活性以及脂代谢信号路径中的关键调控蛋白HSL以及perilipin的磷酸化水平;也可引起葡萄糖转运调控相关的AS160和糖原合成有关的GSK3p的磷酸化水平的相应下降.这说明,钒化合物引起的ROS水平的升高应可能作为一个代谢信号通过激活AKT信号通路而不是通过其直接作用,从而抑制脂解、促进葡萄糖转运和糖原合成.本研究将为钒化合物的进一步开发和应用提供理论依据.
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甘油三酯脂酶（ATGL）生物学研究进展
甘油三酯脂肪酶（ATGL）是参与脂肪分解的关键酶，能够特异性水解甘油三酯（TG）第一酯键，在能量代谢中起着重要作用。它介导的脂解反应与肥胖、二型糖尿病有密切的关系。
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3T3-L1前脂肪细胞烟碱样胆碱能受体α7亚型功能状态对chemerin及其受体chemerinR基因表达的影响
目的 观察3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中chemerin及其受体(chemerinR)基因表达水平的变化趋势, 及脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统尤其是烟碱样胆碱能受体α7功能状态对前脂肪细胞和诱导分化成熟脂肪细胞中新型促脂解脂肪因子chemerin和其受体基因表达水平的影响,旨在探讨脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统对脂解影响的分子机制.方法 "经典激素鸡尾酒法"(1-甲基 3-异丁基黄嘌呤+胰岛素+地塞米松+胎牛血清+DMEM/F12培养基)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并于分化进程中0 h,6 h,12 h,1 d,3 d,6 d和9 d收集细胞并提取总RNA, RT-PCR技术检测chemerin、chemerinR mRNA时序性变化规律.并加入不同浓度(10-8 mol/L、10-6 mol/L和10-4 mol/L)的烟碱样乙酰胆碱受体α7激动剂氯化胆碱和拮抗剂甲基牛扁亭碱,分别处理3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的脂肪细胞12 h、24 h和36 h后,抽提总RNA, RT-PCR检测chemerin、chemerinR mRNA的表达.结果 ①在诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟的过程中,二者基因均呈现逐渐升高趋势,至分化末期表达水平高.②与相应作用时点的空白对照组比较,氯化胆碱能显著下调前脂肪细胞chemerin、chemerinR mRNA和成熟脂肪细胞中chemerin mRNA水平;甲基牛扁亭碱则明显上调前脂肪细胞chemerin、chemerinR mRNA和成熟脂肪细胞中chemerin mRNA水平,上述两种干预均对成熟脂肪细胞中chemerinR mRNA水平无明显影响.③且在相同浓度、相同时间干预下,烟碱样胆碱能受体α7特异性激动剂或拮抗剂对前脂肪细胞中chemerin、chemerinR mRNA水平影响均较诱导分化成熟脂肪细胞组显著.结论 前脂肪细胞上烟碱样胆碱能受体α7,很可能是介导前脂肪细胞固有胆碱能系统发挥生物学效应的重要物质,除参与脂解的直接调控外,还可能通过影响自身脂肪因子的表达实现间接调节.
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杨梅素联合围脂滴蛋白对脂肪细胞脂解的影响
目的 研究杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)联合作用对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响.方法 常规培养及诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出Myric佳干预浓度和时间.Myric联合sh-RNA干扰载体对已诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行联合干预,实验共分为四组:联合干预组(Myric+sh-RNA)、转染组(sh-RNA)、杨梅素组(Myric)和空白组.采用油红O进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法检测细胞中三酰甘油(TG)和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western blot检测脂肪细胞中PLIN1A、三酰甘油脂肪酶(ATGL)和激素敏感性脂肪酶(HSL)的表达量.结果 以浓度为100μmol/L的Myric干预72 h时,细胞内TG含量低,甘油含量高,脂解效果佳,与其他浓度和干预24 h比较,差异有统计学意义(P<0.05).联合干预后,与Myric组和sh-RNA组比较,Myric+sh-RNA组细胞内TG含量下降,甘油含量升高,脂滴形态变小,数量减少,差异有统计学意义(P<0.05).同时,Myric+sh-RNA组PLIN1A蛋白表达量降低,ATGL和HSL蛋白表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Myric联合PLIN1可以更有效降低PLIN1表达量,提高ATGL与HSL的表达量,从而提高脂解效率.
关键词： 脂肪细胞/肥胖症 杨梅素 围脂滴蛋白 3T3-L1脂肪细胞 脂解 -
外源性硫化氢对小鼠原代肝细胞内脂质自噬分解的影响
目的:研究硫化氢(H2 S)供体GYY4137释放的外源性H2 S对小鼠原代肝细胞内脂质自噬分解的影响.方法:采用2步原位灌流法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞并分为4组:用正常培养基培养正常组细胞;模型组用含1.2 mmol/L油酸(溶于10%的BSA)的培养基培养48 h;H2 S组和炔丙基甘氨酸(PAG)组则用1.2 mmol/L油酸(溶于10%的BSA)的培养液培养48 h,然后换无血清无酚红的RPMI-1640培养液(同时分别给予1 mmol/L GYY4137和200μmol/L PAG)处理6 h.收集各组细胞做LC3免疫荧光染色,拍摄荧光和相差图片;Western blot检测肝细胞中LC3-Ⅰ/Ⅱ的蛋白表达量;透射电镜观察肝细胞超微结构.结果:和模型组相比,H2 S组肝细胞内LC3荧光颗粒和蛋白表达量增加,自噬溶酶体数量增加,细胞内空泡增多.结论:外源性H2 S可促进脂肪变性肝细胞内脂质自噬分解.
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沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素对3T3-L1脂肪细胞脂解的机制探究
目的 研究沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素(ISO) 联合作用对3T3 - L1脂肪细胞脂解的影响及机制探讨.方法sh - PLIN1干扰载体成功转染后,以浓度为10μM的ISO处理3T3 - L1脂肪细胞.采用油红O进行脂滴染色,观察脂滴形态; 采用酶学方法 测定甘油三酯(TG) 和甘油含量,了解细胞脂解情况; 采用Western - Blot法检测脂肪细胞中围脂滴蛋白A(PLIN1A) 、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL) 、激素敏感性脂肪酶(HSL) 和其磷酸化蛋白(p - HSL) 的表达水平; 双抗体夹心ABC - ELISA法检测细胞中环磷酸腺苷(cAMP) 和蛋白激酶A(PKA) 的浓度.结果 与空白组比较,ISO + sh - PLIN1组和ISO组脂滴变小,TG含量降低,甘油含量升高,有统计学意义(P ＜ 0.01) .同时, ISO + sh - PLIN1组和sh - PLIN1组中ATGL表达量均升高,有统计学意义(P ＜ 0.05) .ISO + sh - PLIN1转染组和ISO组中HSL、p - HSL、cAMP及PKA的表达量均上调(P ＜ 0.05) .结论ISO促进脂解作用可能是cAMP/PKA通路介导,增加HSL和p - HSL的表达量来实现,而cAMP/PKA信号通路不能介导沉默PLIN1的促脂解作用.
关键词： 异丙肾上腺素(ISO) PLIN1基因沉默 3T3-L1脂肪细胞 脂解
