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应用液相放大酶免分析检测特异性IgE的方法学研究
应用体外免疫分析检测血清中特异性IgE(SIgE)是诊断过敏性疾病的关键技术.液相放大的酶免分析方法(L-BA-EIA)的优点是:能够克服固相酶免法中的低反应动力学问题以及由于增加固相包被量所致的"空间位阻"(Steric hindrance, SH)和"高剂量挂钩效应"(High dose hook effect, HDHE)[1-3].本研究化学修饰了我国常见的几种变应原,建立了L-BA-EIA检测SIgE的方法.
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二步夹心ELISA分析中"HD-HOOK"效应的抗体铰链区变构假说
二步夹心ELISA分析是将待测抗原与固相包被抗体反应,洗涤去除未结合成分,然后加入标记抗体与被捕捉的抗原结合,其反应信号通常正比于抗原浓度,当抗原超过一定量时,使固相包被抗体呈饱和结合状态,其剂量反应曲线呈平台状延伸.1974年Miles等[1]在二步夹心ELISA法测定铁蛋白的实验中发现,当抗原浓度达到或超过某一高值时,反应信号呈现降低态势,即二步夹心ELISA分析中"HD-HOOK"效应.
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不同组合 CD3、CD28抗体对 CIK 细胞诱导培养的探索研究
目的:探索利用CD3、CD28抗体对人外周血单个核细胞(PBMC)体外激活转化增强作用,采用不同包被方法及抗体浓度,以期获得一种更有效的包被方法。方法利用人外周血单个核细胞分离技术、体外细胞培养技术及流式细胞术(FMC),以 CD3抗体固相包被、CD28抗体不同浓度固相包被或悬浮加入,计算经12 d 培养获得成熟 CIK 细胞的数量,测定不同包被方法刺激培养后的细胞表型的变化。结果培养后 C 组中 CD4+细胞百分比明显低于 A 组,差异有统计学意义(P <0.05)。C 组中CD8+细胞所占比例高于 A、B 组(P <0.05)。C 组的 T4/T8比值与 A、B 组差异有统计学意义(P <0.05)。B 组 NK 细胞含量与C 组差异有统计学意义(P <0.05)。CD25+细胞在 C 组中所占比例低于 A 组(P <0.01)。结论CD3抗体固相包被及 CD28抗体悬浮加入组合对人外周血细胞的刺激增强作用强于 CD3抗体固相包被 CD28+抗体固相包被组合。
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癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析
采用了两株CEA单克隆抗体(McAb),一株用于固相包被,另一株用于标记制备125I-CEAMcAb,研制了一步法CEA免疫放射分析(IRMA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.5μg/L,批内变异系数<10.0%,批间变异系数<15.0%,回收率为97.4%~108.9%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值<10.0μg/L.