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人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定
目的：克隆和表达人颗粒酶A（ Granzyme A，GzmA）基因的活性片段（ active Granzyme A，aGzmA）并进行活性鉴定。方法：以全长人GzmA基因为模板，PCR扩增aGzmA基因片段，限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后插入原核表达载体pET24a（＋），将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经SDS－PAGE和Western blot进行分析。重组蛋白用镍层析柱亲和层析进行纯化后，利用BLT底物溶液进行活性鉴定。结果：PCR扩增得到长约700 bp的基因片段。重组质粒pET24a－aGzmA经酶切和测序证实aGzmA基因序列正确插入载体质粒中。 SDS－PAGE显示在26 kD处有一特异性蛋白条带。 Western blot证实该蛋白可与小鼠抗His 单克隆抗体发生特异性结合。利用镍柱亲和层析法可从包涵体中纯化得到纯度较高的重组蛋白，且具有较好的酶活性。结论：成功制备了具有生物学活性的人颗粒酶A重组蛋白。
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人颗粒酶A全长基因的克隆及原核表达
目的 克隆人颗粒酶A (Granzyme A,GzmA)基因,在大肠杆菌中进行表达,并初步优化表达条件.方法 通过RT-PCR扩增人GzmA基因,插入原核表达载体pET24a(+)中,构建重组表达质粒pET24a-GzmA,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值 进行优化.结果 重组表达质粒pET24a-GzmA经双酶切和测序,证实GzmA基因已正确插入载体中,且序列正确；表达的重组蛋白相对分子质量约29 000,且可与小鼠抗His单抗特异性结合；工程菌的佳诱导温度为37℃,IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值对重组蛋白的表达量影响较小.结论 成功克隆了人GzmA基因,并在大肠杆菌中进行了表达.
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SET复合物在颗粒酶A触发的细胞凋亡中的作用
颗粒酶A(Granzyme A,Gzm A)引发肿瘤细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific proteinases,cas-pase)非依赖的细胞凋亡,随着SET复合物(SET complex)组成的确定,该凋亡通路的分子机制研究得以不断深入,本文就SET复合物在该通路中发挥的作用作一综述.
关键词： SET复合物 nm23-H1 颗粒酶A caspase非依赖的细胞凋亡
