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抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定
目的:制备抗潮霉素B磷酸转移酶(HPT)的单克隆抗体(McAb),建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法.方法:用基因重组潮霉素B磷酸转移酶(HPT)抗原免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb.选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对,建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原.结果:筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定均为IgG1,ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白.结合位点测定实验表明4株单抗是针对不同的抗原决定簇,与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法,均可较好地检测到HPT抗原.检测的灵敏度为30 ng/ml,且与别的无关抗原无交叉反应性.结论:4株杂交瘤细胞株特异性好,亲和力强,组成双抗夹心ELISA法可用于快速、灵敏检测HPT抗原.
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脑梗死患者急性时相反应蛋白检测及临床意义
目的探讨C-反应蛋白(CRP)、前白蛋白(PA)、α1酸性糖蛋白(AAG)、触珠蛋白(HPT)、铜兰蛋白(CER)在脑梗死患者血清中的变化及临床意义.方法采用特定蛋白分析仪对97例脑梗死患者(发病1周内)进行CRP、PA、AAG、HPT、CER水平的测定.结果CRP、PA、AAG、HPT随梗死范围大小和病变的严重程度而变化,有显著性差异.CER无显著性差异.结论血清CRP、PA、AAG、HPT可能在脑梗死患者的发生发展中起一定作用,且水平随梗死范围大小而变化.
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利用DNA免疫法制备植物选择标记基因hpt表达蛋白抗体的研究
目的: 制备转基因作物中选择标记基因潮霉素B磷酸转移酶(hygromycin B phosphotransferase, hpt)基因表达产物的多克隆抗体, 并探讨影响核酸免疫效果的因素及相应机制.方法: 以hpt的cDNA全长插入真核表达载体pCDNA3中, 并经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定. 以纯化的重组质粒pCDNA3-HPT免疫BALB/c小鼠.用在E.coli中表达并纯化的(His)6-HPT进行ELISA, 检测免疫过程中小鼠血清抗体效价的增长状况, 并用Western blot检测抗血清的特异性.结果: 经3次核酸免疫后, 小鼠血清中未发现明显的抗HPT抗体.第4次加强免疫时, 将小鼠分为3组, 每组两只.第1组改用去内毒素的质粒提取试剂盒提纯的重组质粒免疫, 第2组用 (His)6-HPT融合蛋白免疫, 第3组仍用原来提取的重组质粒免疫.结果发现, 第1组小鼠抗血清的效价有所上升, 经ELISA检测达1∶200; 第2组抗血清的滴度显著升高, 达到1∶2 000; 而第3组小鼠血清中仍未检测到明显的抗体.Western blot证实, 前两组抗血清均可与亲和层析纯化的GST-HPT、(His)6-HPT融合蛋白及其诱导表达的相应菌体总蛋白发生特异性结合.结论: 用DNA免疫法成功地制备了抗hpt基因表达产物的特异性抗体, 但抗体效价不够理想.推测与hpt基因本身的性质及其在体内表达呈现的水平有关,可望通过调整影响核酸免疫的其他多种因素提高抗体的水平.
