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B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究
目的:构建B群脑膜炎奈瑟菌pcDNA3.1 (+)/NMB0315 真核表达重组质粒,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供实验依据. 方法:以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增NMB0315基因,克隆至pcDNA3.1 (+)真核表达载体中,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切及测序鉴定重组质粒.构建成功的pcDNA3.1(+)/NMB0315重组质粒转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,免疫细胞化学染色法和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达. 大量提取重组质粒,肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内抗NMB0315的特异性体液免疫和细胞免疫水平;测定免疫血清体外杀菌滴度,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护效果. 结果:构建的核酸疫苗pcDNA3.1 (+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达;免疫小鼠后能诱导产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答. 在疫苗免疫后的2、4、6周,pcDNA3.1(+)/NMB0315组和pcDNA3.1(+)/NMB0315+CpG组血清总IgG及IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3亚类抗体水平呈递增趋势,均明显高于PBS、pcDNA3.1(+)、CpG对照组(P<0.001);小鼠血清IgG2a/IgG1比值均小于1;生殖道灌洗液中特异性sIgA水平均明显高于PBS、pcDNA3.1(+)、CpG对照组(P<0.01). 免疫第6周,脾淋巴细胞刺激指数(SI)均明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05). pcDNA3.1(+)/NMB0315+CpG、pcDNA3.1(+)/NMB0315 疫苗组免疫血清补体介导的体外杀菌效价分别为1:128和1:64;在致死量B群脑膜炎奈瑟菌MC58攻击后72 h存活率分别为70%和65%,对照组[PBS,pcDNA3.1(+),CpG]72 h存活率为0. 结论:NMB0315核酸疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫应答;免疫血清补体介导的体外杀菌活性较高;NMB0315核酸疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌小鼠具有较强的免疫保护作用.
关键词： B群脑膜炎奈瑟菌 B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315 核酸疫苗 免疫活性 免疫保护
