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重组腺病毒转导的MSC导向的CNTF基因靶向性治疗MS对髓鞘和轴突的保护作用
目的:探讨重组腺病毒转导的骨髓间充质细胞导向(MSC)的睫状神经营养因子(CNTF)基因靶向性治疗多发性硬化对髓鞘和轴突的保护机制.方法:先构建、扩增、纯化Ad-CNTF-IBES-GFP,在体外培养MSC细胞.将1×108Ad-CNTF-IRES-GFP转染MSCS1×106,测定上清液中CNTF的浓度.再用MOG 35-55建立C57BL/6小鼠EAE模型,将Ad-CNTF-IRES-GFP转染的MSC移植治疗EAE小鼠,观察其病情评分;免疫荧光观察其病变部位的外源性MSO数量;免疫组化观察少突胶质细胞前体细胞(OPC)-NG2(+)细胞在病变部位的数量,Western blot和免疫组化法观察神经生长因子CNTF表达,免疫组化观察促凋亡蛋白Caspase-3表达;病理观察髓鞘、轴突损伤情况;电镜观察髓鞘和轴突以及ODC损伤情况;所有的数据用(x)±s表示.采用SPSS 13.0进行统计分析.结果用多因素方差分析,P＜0.05差异有显著性.结果:MSC-Ad-CNTF-IRES-GFP治疗的EAE小鼠病情显著减轻.不仅平均发病时间缩短,发病率下降,病情减轻,而且病情严重程度也明显减轻.外源性MSC出现在EAE的脊髓病变部位.治疗后的EAE小鼠脊髓病变部位的NG2(+)表达明显增加,促凋亡蛋白Caspaae-3的表达明显降低.治疗后的EAE小鼠病变部位的髓鞘和轴突变性明显减轻.结论:MSC-AD-CNTF-GFP可有效治疗EAE动物.其机制可能是:Ad-CNTF-IRES-GFP转染的MsC细胞定向去病变部位,升高其部位CNTF水平和NG2(+)细胞数量,减轻其部位髓鞘、轴突及ODC损伤,减少促凋亡蛋白Caspase-3表达.
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睫状神经生长因子对视网膜神经节细胞凋亡的影响
目的 研究睫状神经营养因子(CNTF) 对视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响.方法 取雌性SD大鼠36只,随机分为两组,每组各18只.麻醉后于眶内距视神经根部1.5 mm处切断左侧视神经,眶侧残端留置浸有荧光金的明胶海绵以逆行标记RGC.术前30 min及术后每天腹腔注射CNTF和生理盐水(对照组),分别于术后2 d、7 d及14 d各处死6只大鼠.动物处死后,将视网膜平铺,计数每只动物荧光金标记的存活RGC并得出存活RGC的平均密度.比较各组RGC密度.结果 睫状神经营养因子(CNTF)组视神经切断后7 d RGC平均密度为1 727 mm±71 mm,显著高于同一时间点对照组RGC密度1 086 mm±91 mm.结论 睫状神经营养因子(CNTF)在大鼠视神经切断后7 d,可促进RGC的存活.
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CNTF与NGF对视神经损伤模型大鼠视网膜神经节细胞的影响
目的:本实验通过给视神经不全损伤模型大鼠玻璃体腔内注射外源性神经生长因子(NGF)及外源性睫状神经营养因子(CNTF),观察两种神经营养因子对视网膜神经节细胞是否具有一定的保护作用.方法:将30只Wistar大鼠随机分组,利用无创血管钳造成大鼠左眼视神经的不全损伤,右眼不予任何处理,作为正常对照组.并在造模成功后分别给予大鼠左眼玻璃体腔内注射NGF及CNTF各2μL,作为两组实验治疗组,实验对照组在相同时间给予大鼠左眼玻璃体腔内注射平衡盐溶液2μL.在大鼠视神经不全损伤后5d、10d时分别做RGC计数、光镜组织学观察及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)免疫组织化学检测.结果:光镜下,伤后5d-10d光镜下观察实验组视网膜及视网膜神经节细胞均有不同程度水肿及肿胀,RGC数量明显比正常对照组下降,有明显的统计学差异(P＜0.01),两组实验治疗组视网膜神经节细胞数目明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).免疫组织化学染色结果,伤后5d实验组GCL层GAP-43表达均呈阳性,实验治疗组GAP-43的表达量明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).10d后实验治疗组GAP-43表达量达高峰,实验对照组GAP-43表达量明显减少,具有明显统计学差异(P＜0.05).结论:在视神经受损后NGF与CNTF能提高视网膜神经节细胞的存活率,延长GAP-43的表达时间并增加其表达量,对视网膜神经节细胞具有一定的保护作用.
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白松片对抑郁模型大鼠海马神经元睫状神经生长因子及其mRNA表达水平的影响
目的观测白松片对抑郁模型大鼠海马睫状神经生长因子(CNTF)及其mRNA表达水平的影响,探讨白松片的抗抑郁作用的机制.方法将大鼠随机分为正常组、模型组、白松片组、氟西汀组,采用连续21d慢性轻度不可预见性应激配合孤养复制抑郁模型.运用免疫组化和原位杂交方法探讨白松片对抑郁模型大鼠海马神经元细胞CNTF、CNTF mRNA表达的影响.结果白松片组大鼠海马神经元CNTF免疫反应阳性细胞数目增多,神经元平均灰度值降低,其中CA1区(105.14±7.21),CA3区(104.47±6.05),DG区(108.18±7.56);CNTFmRNA杂交阳性信号增加,神经元平均灰度值降低,其中CA1区(182.14±12.68),CA3区(176.82±11.12),DG区(175.98±12.15).与模型组比较,差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论白松片增加抑郁模型大鼠海马CNTF、CNTF mRNA的表达,可能是其抗抑郁作用的分子机制之一.
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睫状神经生长因子对神经和肌肉作用研究进展
在临床工作中,神经肌肉损伤是常见的现象.探讨加速修复是迫切需要解决的问题.随着对细胞因子的了解,睫状神经生长因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)在神经肌肉方面的作用逐渐成为研究热点,但至今许多问题仍不完全清楚.因此,对睫状神经生长因子的研究正在进一步深入.
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睫状神经生长因子与眼病的相关研究
睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是神经保护因子中被研究的多的因子之一,细胞包囊技术(encapsulated cell technology,ECT)为CNTF的临床应用提供了安全有效的给药途径.大量的研究证据表明,CNTF对视网膜色素变性、青光眼、年龄相关性黄斑变性、视神经损伤等眼部疾病具有神经保护作用.本文就CNTF与眼病的相关研究进展进行综述.
