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Akt磷酸化在A549细胞抵抗rsTRAIL蛋白诱导细胞凋亡的研究
目的：研究Akt磷酸化抵抗rsTRAIL蛋白诱导肺癌A549细胞株凋亡的作用机制。方法：rsTRAIL蛋白和哌立福新单独和联合作用于细胞株A549，Western blot检测A549细胞中Akt磷酸化水平变化、c-FLIPLL表达水平变化、caspase-8蛋白活化变化情况。流式细胞术进行细胞凋亡检测。 MTT法检测A549细胞增殖率。结果：Western blot结果显示，rsTRAIL蛋白可以导致A549细胞中Akt磷酸化水平的增加，哌立福新能够抑制A549细胞中Akt的磷酸化水平及c-FLIPLL表达水平，增强A549细胞中caspase-8的活化。哌立福新能提升rsTRAIL蛋白诱导A549细胞的细胞凋亡率至（76．5±3．02）％和杀伤活性到（83．2±2．54）％。结论：Akt磷酸化是导致A549细胞对抵抗rsTRAIL 诱导细胞凋亡的重要原因，抑制其活性可以促进rsTRAIL蛋白发挥抗NSCLC的活性。
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Akt抑制剂哌立福新通过减少乳酸生成抑制胃癌细胞增殖与迁移
[目的]探究Akt抑制剂哌立福新对胃癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用及其可能机制.[方法]采用不同浓度哌立福新处理胃癌MGC803和SGC7901细胞.细胞增殖采用磺酰罗丹明B法检测,流式细胞仪Annexin V-/PI双染法检测细胞凋亡,细胞迁移和侵袭分别采用细胞划痕实验法和Transwell小室实验检测,乳酸含量的测定采用ELISA法,以蛋白印迹法检测糖酵解通路相关蛋白水平的变化.[结果]哌立福新在2.0 μmol/L浓度剂量时即能有效抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901细胞增殖.经哌立福新低中高剂量(2.0、10.0、20.0 μmol/L)处理后,MGC803细胞凋亡明显增加(P＜0.05).划痕间距分别为407.2±.34.4 μm,657.2± 49.2μm和910.8±51.4.1μm,与对照组240.3±27.8 μm相比均有显著性差异(P＜0.05),且呈量效关系.Transwell小室实验显示每个视野下侵袭的MGC803细胞数对照组为2584±228个,而经哌立福新低中高剂量处理后分别为2052±158 (P＜0.05),1410±105(P＜0.01)和887±87 (P＜0.01),与对照组相比均有显著性差异,并呈剂量依赖性.不同剂量哌立福新均可显著性降低培养基和细胞中乳酸含量,同时,蛋白质印迹结果提示哌立福新显著性抑制与糖酵解乳酸生成相关的乳酸脱氢酶-A,葡萄糖转运蛋白(Glucose transporter,GLUT)1,GLUT4和IGF-1的表达(P＜0.05),且呈剂量依赖性.[结论]哌立福新能有效抑制MGC803细胞迁移与侵袭,其机制与降低糖酵解从而减少乳酸生成相关.
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Akt抑制剂的临床研究进展
随着十几个Akt小分子抑制剂先后进入临床研究,Akt已逐渐成为抗肿瘤药物研究的热门靶点.本文主要综述Akt蛋白的结构和功能,同时详细介绍一些已进入临床试验并且极具开发应用前景的小分子Akt抑制剂,如哌立福新、MK-2206、GSK2110183等,并对它们的临床前和临床研究情况进行阐述.
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哌立福新联合顺铂抑制骨肉瘤细胞U2-OS的活性研究
目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂哌立福新协同化疗药物顺铂(DDP)对骨肉瘤细胞U2-OS增殖和凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测哌立福新对U2-OS细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡;免疫印迹法检测蛋白表达水平.结果 哌立福新能够显著抑制U2-OS细胞的增殖,并下调U2-OS细胞中Akt的磷酸化水平.哌立福新明显增强顺铂对U2-OS细胞的抑制作用,并通过活化胱天蛋白酶家族成员来诱导U2-OS细胞发生凋亡.结论 PI3K/Akt 抑制剂哌立福新能够显著抑制人骨肉瘤细胞U2-OS的生长;哌立福新和顺铂协同抑制U2-OS 细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与共同调节胱天蛋白酶家族因子的活性相关.
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哌立福新对裸鼠皮下移植瘤的抑制作用
目的:探讨哌立福新对裸鼠皮下瘤生长的抑制作用.方法:建立荷人食管癌Eca109细胞的裸鼠皮下瘤模型,分别观察对照组及经哌立福新、顺铂和哌立福新联合顺铂治疗后荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况,应用TUNEL法观察肿瘤组织中细胞凋亡情况,Western-Blot法观察肿瘤组织中Akt、mTOR蛋白表达.结果:哌立福新和顺铂单独使用均使肿瘤生长速度减慢(P＜0.05),二者联合对肿瘤生长抑制效果更明显(P＜0.01).TUNEL法检测发现哌立福新在体内能引起Eca109细胞凋亡(P＜0.05),Western-Blot法结果表明哌立福新在体内通过抑制Akt/mTOR信号通路的活性,促进细胞凋亡,从而抑制人食管癌Eca109细胞的生长.结论:哌立福新联合顺铂可抑制裸鼠皮下食管癌移植瘤的生长,其机制可能是通过Akt/mTOR信号通路发挥作用.
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蛋白激酶B抑制剂哌立福新对食管癌细胞侵袭影响
目的 探讨蛋白激酶B(Akt)抑制剂哌立福新对食管癌细胞侵袭的作用机制.方法 应用哌立福新作用于人食管癌Eca109细胞株,通过Western Blotting检测Akt信号通路中相关蛋白Akt、基质金属蛋白-2(MMP-2)基质金属蛋白-9(MMP-2)的表达情况.通过Transwell实验评价食管癌Eca109细胞侵袭变化情况.结果 Western Blotting结果示:与空白对照组、DMSO组相比,哌立福新组能有效抑制食管癌Eca109细胞中Akt、MMP-2、MMP-9蛋白的表达.Transwell侵袭实验表明:DMSO组、空白对照组、哌立福新组穿过上室的平均细胞数分别为(81.3±1.52)、(81.0±2.65)、(44.6±2.52),三组的差异具有统计学意义(F =255.1,P＜0.05).结论 哌立福新能有效抑制食管癌Eca109细胞Akt信号通路中相关蛋白的表达,在体外显著抑制Eca109细胞的侵袭.
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哌立福新增强胆管癌细胞化疗敏感性的实验研究
目的 研究哌立福新提高胆管癌细胞系QBC939化疗敏感性的机制。方法 采用台盼蓝染色检测各处理组的活细胞率，MTT法检测细胞生长抑制率，采用流式细胞仪以Annexin V和7-AAD双标法检测各组细胞的早期凋亡率，以及采用RT-PCK和Western blot分别检测相关基因转录水平与蛋白水平的变化。结果 台盼蓝染色检测结果：联合用药(哌立福新20μM与5-Fu 20μM)组与哌立福新(20μM)和5-Fu(20μM)单独用药组作用相比，活细胞率更低(均P<0.01)；MTT法检测，联合用药组的细胞生长抑制率更高，但差异无显著性(均P>0.05)。联合用药组的细胞凋亡率更高(均P<0.05)，Bcl-2 mRNA转录水平及Bcl-2蛋白水平均显著降低(均p<0.05)，Bax mRNA转录水平及Bax和caspase-3蛋白水平均显著升高(均P<0.05)。结论 哌立福新能增强胆管癌细胞的对5-Fu的化疗敏感性，为临床胆管癌的治疗提供新的思路。
