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HAb18G及MMP-2与肝癌细胞分化的关系
研究肝癌细胞膜新分子HAb18G与MMP-2在肝癌组织中的表达以及二者与肝癌组织分化的相关性.对35例肝细胞肝癌(HCC)组织进行了HAb18G及MMP-2免疫组织化学检测,并用常规组织学HE染色确定肝癌的病理分级.HAb18G定位于肝癌细胞膜和胞浆,MMP-2定位于肝癌细胞胞浆内,二者的表达与肝癌分级呈正相关.HAb18G作为一种细胞外基质金属蛋白酶诱导因子,同MMP-2在肝癌组织的表达与肝癌细胞分化程度密切相关.
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CD147相互作用蛋白及其细胞生物学功能
CD147(basigin、EMMPRIN、neurothelin、M6、HAb18G等)是一个跨膜糖蛋白家族,广泛表达于各种上皮细胞,但其表达在大鼠、小鼠、鸡和人等不同种属间存在很大差异性.CD147高表达于上皮来源的肿瘤细胞表面,如肺癌、乳腺癌和肝癌等.CD147抗原胞外段有2个IgSF结构域,跨膜区有一个带电谷氨酸(Glu)残基,胞内段含有40个氨基酸.CD147的结构特点提示其可能参与蛋白-蛋白相互作用.由于CD147分子的3D结构信息还没有获得,与其相互作用的分子还没有完全明确,但近来应用黏附、免疫共沉淀等实验方法,一些研究报道提示,CD147可与整合素(integrin)、环亲合素(cyclophilins)、单羧酸转运器(monocarboxylate transporter,MCT)等蛋白相互作用,而这些蛋白可能作为CD147分子的候选配体或受体,通过蛋白-蛋白相互作用,介导广泛的上皮细胞生物学功能.
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HAb18G/CD147拮抗肽对体内血管生成的影响
肿瘤的侵袭、转移过程是多因素、多步骤的过程,一般涉及肿瘤细胞黏附、运动,细胞外基质降解,肿瘤新生血管生成等多个环节[1].抗肿瘤血管生成是目前抗肿瘤转移药物研究的重要靶环节之一[2].CD147 是新近命名的CD分子[3],又称为Emmprin,其主要功能是诱导基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的产生,促进肿瘤的侵袭和转移[4].HAb18G是本研究中心利用HAb18单克隆抗体筛选获得的相关抗原分子,与CD147分子高度同源[5],具有促进肿瘤转移的作用[6,7].HAb18G/CD147分子拮抗多肽(antagonistic peptides,APs)是本研究中心用HAb18G纯抗原,筛选噬菌体随机肽文库获得的高亲和性12肽(另文发表).本研究采用抗血管生成研究中公认的实验方法[8,9],研究APs对于体内血管生成的抑制作用.
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HAb18G及ER与宫腔粘连形成相关性分析
目的 探讨宫腔粘连患者的子宫内膜组织中HAb18G及ER的表达情况,为宫腔粘连发病机制提供理论依据.方法 通过对因"中度宫腔粘连"在江西省妇幼保健院行宫腔镜下宫腔粘连分离术的患者120例,在进行宫腔镜宫腔粘连分离术(TCRA)中以环状电极刮取粘连组织周围的子宫内膜作为观察组,同时取少许正常子宫内膜作为对照组.采用免疫组化方法检测两组子宫内膜组织中HAb18G、ER的表达情况.结果 ⑴HAb18G、ER的表达部位:HAb18G主要表达在子宫内膜腺上皮细胞的胞浆中,观察组和对照组子宫内膜腺上皮细胞胞浆中HAb18G有不同程度表达,观察组中表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).ER在观察组中表达明显低于对照组.观察组子宫内膜腺上皮细胞核上的ER表达程度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 在宫腔粘连患者的正常子宫内膜中,HAb18G表达明显低于宫腔粘连组织周围的内膜中,表明宫腔粘连的发生与HAb18G产生的成纤维作用相关.另宫腔粘连组织中ER表达低于正常子宫内膜组织中表达,表明宫腔粘连的形成可能与局部低雌激素相关.
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肝癌膜相关抗原HAb18G的提纯及功能鉴定
目的 从新鲜肝癌手术标本中提取肝癌膜相关抗原HAb18G，并鉴定其诱导MMPs分泌的功能。方法 用HAb18mAb制备亲和层析柱，毛细管电泳分析纯化结果；酶谱法鉴定HAb18G的功能。结果 经亲和层析纯化后，HAb18G纯度达96%；酶谱法显示HAb18G刺激人成纤维细胞分泌MMPs的量及种类有明显变化。结论 亲和层析法获得了高纯度的肝癌膜相关抗原HAb18G，其具有细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(即EMMPRIN/CD147)的功能。
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肝癌膜相关抗原Hab18g为CD147分子的鉴定
目的 从蛋白水平验证肝癌膜相关抗原Hab18g为CD147分子,并探讨单抗Hab18和抗CD147mAb识别抗原表位的异同.方法 间接免疫荧光染色,免疫组化ABC法,斑点杂交及FCM加成试验.结果 抗CD147mAb与Hab18两者识别抗原的阳性反应结果一致,先后加用两种单抗所测的平均荧光强度值高于单独用任一种单抗所测的值.结论 Hab 18g应称为CD147分子,Hab 18和抗CD147两株单抗识别抗原不同表位.
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非小细胞肺癌组织中PTEN和HAb18G的表达及相关关系研究
目的:定量分析PTEN 和HAb18G 在非小细胞肺癌组织中的表达特点,并探讨其相互关系.方法:应用免疫组化SP 法检测肺癌、肺良性病变和正常肺组织中PTEN 和HAb18G 蛋白的表达,用ImageProPlus 图像分析软件对PTEN和HAb18G蛋白的阳性单位(PU)进行定量测试.结果:PTEN蛋白在肺癌组织中的表达明显低于肺良性病变和正常肺组织(P<0.05),与肺癌分化、淋巴结转移及pTNM 分期均无关(P>0.05),周围性大于中央型(P<0.05).HAb18G 蛋白在肺癌组织中的表达明显高于肺良性病变和正常肺组织(P<0.05),与肺癌分化、淋巴结转移及pTNM 分期均有关(P<0.05).不同类型的肺组织中PTEN 和HAb18G蛋白表达之间呈负相关(r = -0.312,P = 0.002).结论:PTEN 的低表达或缺失,可能与HAb18G 的异常激活有一定关系,从而对肺癌的发生、发展起重要作用.
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HAb18G/CD147在多种恶性肿瘤中的表达及其临床意义
目的 探讨HAb18G/CD147表达与食管癌、结肠癌、宫颈癌、肺癌、卵巢癌和肝细胞癌的临床相关性.方法 应用免疫组织化学SP染色法分析上述6种恶性肿瘤及其癌旁组织和淋巴结转移灶标本中CD147基因表达和定位,并对CD147表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况进行分析.结果 相对于癌旁组织,CD147在6种肿瘤中的表达均明显生升高.CD147表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和淋巴结转移均显著正相关.结肠癌、宫颈癌以及食管癌中,CD147在浸润深的组织中的表达显著升高(P＜0.05)；宫颈癌、食管癌、肺癌以及卵巢癌中,CD147在淋巴结转移灶中的表达显著升高(P＜0.05),但在结肠癌中差别不显著；结肠癌、宫颈癌、食管癌以及肺癌中,CD147在分化差的组织中的表达显著升高(P＜0.05).结论 CD147表达在分化差、浸润深以及淋巴结转移的组织中明显升高,提示CD147可能是恶性肿瘤的预后指标.
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稳定表达肝癌相关抗原HAb18G/CD147成纤维细胞株的建立及其意义
目的:探讨将HAb18G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/3T3的可行性及其意义.方法:将含有肝癌相关抗原HAb18G全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.0/HAb18G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3,G418筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况;RT-PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb18G刺激3T3细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的情况.结果:利用脂质体介导法将HAb18G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/3T3,G418筛选,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb18G的阳性克隆株;RT-PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP-2、MMP-9 mRNA转录水平较未转染前增多;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强.结论:HAb18G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达,具有其独特的生物学意义.
