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Id3基因在心肌营养素1促心肌成纤维细胞增殖中的作用
目的 探讨在高静水压条件下分化抑制因子3(inhibitory of differentiation 3,Id3 )基因在心肌营养素-1 (cardiotrophin-1,CT-1 ) 促心肌成纤维细胞增殖中的作用.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组( C 组)、CT-1反义寡核苷酸组 (ASODN组) 、正义寡核苷酸组 ( SODN组)、高静水压组( P 组).利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mmHg压力下培养8 h.CT-1活性通过 Western印迹法分析测定,Id3基因表达通过RT-PCR方法测定,MTT测定心肌成纤维细胞增殖 .结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖 ,CT-1表达上调,Id3 mRNA表达增加;CT-1 ASODN干预后能抑制高静水压所致的细胞增殖,CT-1表达下调,Id3 mRNA表达减少.结论 Id3 mRNA在心肌成纤维细胞中有明显表达,且与CT-1促心肌成纤维细胞增殖密切相关.
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Id3上调E-cadherin表达抑制口腔鳞状细胞癌的侵袭
目的:研究Id3的表达在口腔鳞状细胞癌侵袭转移中的作用机制.方法:在UM-SCC-23口腔鳞状细胞癌中瞬时转染Id3真核表达载体,实时PCR和蛋白印迹法检测Id3和E-cadherin在基因和蛋白水平的表达.将E-cadherin启动子载体瞬时转染到UM-SCC-23细胞系中,利用荧光双报告基因系统检测Id3对E-cadherin启动子的调控作用.利用Id3稳定转染UM-SCC-23细胞系进行细胞侵袭实验.结果:Id3促进了E-cadherin基因和蛋白水平的表达,增强了E-cadherin启动子活性,稳定表达Id3的UM-SCC-23细胞系侵袭能力降低.结论:Id3能够促进E-cadherin表达,抑制口腔鳞状细胞癌的侵袭.
关键词： 分化抑制因子3 E-cadherin 表达 侵袭转移 -
ID3、VEGF和CD34在胃癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨分化抑制因子3(ID3)、VEGF和CD34在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化检测80例胃癌组织(胃癌组)和80例切缘癌旁组织(癌旁组)中ID3、VEGF以及CD34的表达,并分析其相关性.结果 胃癌组ID3、VEGF和CD34的阳性表达率分别为78.75%、63.75%和62.50%,高于癌旁组的28.75%、22.50%和26.25%(P<0.05).胃癌组织中ID3与VEGF、CD34的表达相关(P<0.05).结论 ID3、VEGF和CD34与胃癌的发生、发展密切相关,联合检测可用于判断胃癌患者的预后.
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Id3过表达对不同肿瘤细胞中β-catenin的调节
目的 分化抑制因子3(Id3)参与肿瘤发生、细胞增殖和凋亡等过程;β-catenin是导致肿瘤发生的关键.文中探讨Id3与β-catenin在不同肿瘤细胞中的表达及Id3对β-catenin的调控作用. 方法 采用Trizol法提取各肿瘤细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)分析肿瘤细胞中Id3和β-catenin的相对表达量;用非脂质体转染技术将含人Id3基因的真核表达载体pEGFP/ Id3分别导入SW-480、人肺腺癌细胞A549和人肺腺癌细胞耐顺铂株A549/DDP 3种细胞,荧光显微镜观察细胞内 EGFP-Id3融合蛋白的表达情况;qRT-PCR技术分析转染后细胞内Id3及β-catenin mRNA的表达水平;Western blot 分析转染后细胞内Id3及β-catenin 蛋白的表达水平. 结果 Id3在肠癌SW-480及HT-29细胞中表达量低,明显低于A549及其他肿瘤细胞(P<0.05);在鼻咽癌CNE、5-8F细胞中的表达量显著高于其他肿瘤细胞组(P<0.05).Id3表达量低的肠癌SW-480中β-catenin与其他组细胞相比含量高(P<0.05),Id3表达较低的胃癌AGS细胞及肠癌HT-29细胞β-catenin表达次之,其他肿瘤细胞如H446、A549、SPC-A-1、A549/DDP、SK-MES-1细胞中β-catenin均呈低表达,而Id3表达量较高的CNE、5-8F等肿瘤细胞中β-catenin的含量相对极低或几乎不表达,且与其他组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05).荧光显微镜观察发现,转染Id3/pEGFP的细胞体积缩小,细胞膜皱缩,折光度消失,而转染空载体pEGFP后,大部分细胞未见上述变化.与对照组相比,Id3/pEGFP组A549、A549/DDI、SW-480细胞转染后Id3 mRNA表达水平均有显著增高(1.24±0.12 vs 193.12±2.80,1.09±0.11 vs 188.30±2.60,0.92±0.29 vs 19.08±0.59,P<0.01).与对照组比较,β-catenin mRNA在Id3过表达的肠癌SW-480细胞中表达明显下调(0.98±0.05 vs 0.32±0.03,P<0.01);而在A549和A549/DDP细胞中,Id3转染后β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05).Western blot检测结果显示,与对照组比较,Id3过表达后可明显下调肠癌细胞SW-480中β-catenin的表达水平,而肺癌细胞A549和A549/DDP中β-catenin的表达水平则无明显变化. 结论 Id3和β-catenin在不同的肿瘤细胞中有不同的表达水平,提示β-catenin在肠癌细胞中的异常高表达是引起肠癌的重要因素之一;外源性转染Id3基因抑制肠癌SW-480细胞中β-catenin的表达,有望为肠癌靶基因治疗提供新思路.
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外源性人分化抑制因子3在A549/DDP细胞中的表达及意义
目的:Id 蛋白即分化抑制因子(Id),在人类多种肿瘤中异常表达,并参与肿瘤细胞的增生、分化和凋亡等.文中旨在探讨人分化抑制因子3(Id3)基因体外转染在人肺腺癌细胞顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达及意义. 方法:构建人Id3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体Id3/pEGFP,采用脂质体介导的转染技术将Id3融合基因(Id3-EGFP)导入A549/DDP细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞内EGFP的表达情况;半定量RT-PCR检测Id3表达的改变;MTT法观察Id3对细胞的增殖抑制情况. 结果:成功构建人Id3/pEGFP真核表达载体并转染A549/DDP细胞,倒置荧光显微镜下转染的A549/DDP细胞发出强绿色荧光,转Id3/pEGFP质粒的细胞其荧光主要表达于细胞核;RT-PCR结果显示Id3 mRNA在转染后的A549/DDP细胞能有效表达;MTT法结果表明,与对照组相比,转染Id3重组质粒的细胞增殖被抑制. 结论:转染的Id3/pEGFP融合基因在A549/DDP细胞能有效表达,外源性Id3基因能抑制该细胞的增殖.
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人分化抑制因子3基因原核表达载体的构建及融合蛋白的表达
目的:在大肠埃希菌中表达和纯化人分化抑制因子3(Id3),为进一步研究Id3的生物学活性打下基础. 方法:PCR扩增人Id3基因编码区的DNA片段,将PCR产物克隆至pGEM-T Esay载体中并测序鉴定.将Id3 cDNA片段重组入原核表达质粒pET-32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,表达产物经Western blot 鉴定,并通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的融合蛋白. 结果:成功地构建了Id3的原核表达载体.Western blot分析证实,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了His-Tag融合蛋白,亲和层析法纯化后获相对分子质量为34 000的Id3融合蛋白. 结论:重组质粒pET32a(+)-Id3能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,镍亲和层析柱可纯化获得融合蛋白.
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ID3过表达对肝细胞癌多柔比星化疗敏感性的影响及其机制
目的 探讨分化抑制因子3(ID3)对肝细胞癌(HCC)多柔比星(DOX)化疗敏感性的影响及其可能的作用机制.方法 体外培养肝癌HepG2细胞、肝癌阿霉素(ADM)耐药HepG2细胞(HepG2/ADM细胞),采用qRT-PCR法检测两种细胞ID3 mRNA表达.选择传2代、对数生长期、生长状态良好的HepG2/ADM细胞,随机分为对照组和实验组,分别转染阴性对照慢病毒质粒、ID3过表达慢病毒质粒.转染24 h,收集细胞,采用qRT-PCR法检测ID3 mRNA表达;分别加入不同浓度DOX处理,检测DOX的IC50值;采用TUNEL凋亡染色法、流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白(pPI3K、pAKT、Bcl-2)表达.结果 HepG2/ADM细胞ID3 mRNA相对表达量为0.24±0.04,HepG2细胞为1.00±0.11,两者比较P<0.05.实验组ID3 mRNA相对表达量为13.54±2.33,对照组为1.00±0.00,两组比较P<0.05.实验组DOX的IC50值为(0.12±0.03)μg/mL,对照组为(0.25±0.04)μg/mL,两组比较P<0.05.实验组两种检测方法的细胞凋亡率均明显高于对照组(P均<0.05).实验组pPI3K、pAKT、Bcl-2蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05).结论 ID3过表达可提高HCC对DOX的化疗敏感性,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达有关.
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应激诱导磷酸化蛋白1调控分化抑制因子3表达在胃癌细胞上皮-间充质转化及侵袭迁移过程中的作用及其机制
目的 观察应激诱导磷酸化蛋白1(STIP1)通过调控分化抑制因子3(ID3)的表达在胃癌细胞上皮-间充质转化及侵袭迁移过程中的作用并探讨其机制.方法 Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测胃癌细胞(BGC803)和正常胃黏膜细胞(GES-1)2株细胞中STIP1、ID3的mRNA及蛋白的表达.转染STIP1过表达载体和小干扰RNA (siRNA)感染序列至胃癌细胞,检测STIP1和ID3的表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移及侵袭,Western blot检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达,并与阴性转染细胞比较.结果 STIPl mRNA和蛋白在BGC803的相对表达量分别为1.851±0.058,2.033±0.107,明显高于GES-1中的1.000±0.034,1.000±0.031(t=21.924,P=0.000;t=16.061,P=0.004).ID3 mRNA和蛋白在BGC803的相对表达量分别为1.629±0.063,2.374±0.096,明显高于GES-1中的1.000±0.025,1.000±0.029(t=16.074,P=0.004;t=23.731,P=0.002).转染STIP1过表达载体后ID3 mRNA的相对表达量为2.018±0.124,较对照组1.331±0.036(t =9.216,P=0.012)明显升高;转染48 h和72 h后细胞增殖水平明显高于对照组(t=10.594,P=0.002;t=8.269,P=0.004);侵袭细胞数、迁移细胞数较对照组明显增加(t=5.669,P=0.011;t =5.265,P=0.013);Vimentin的表达明显升高(t=7.410,P=0.005),E-cadherin明显降低(t=-5.821,P=0.010).转染STIP1 siRNA感染序列后ID3 mRNA的相对表达量为0.732±0.037,较对照组的1.252±0.051明显降低(t=-14.295,P=0.001);转染48 h、72 h后细胞增殖水平明显低于对照组(t=-19.851,P=0.000;t=-19.222,P=0.008);侵袭细胞数、迁移细胞数较对照组明显减少(t=-5.822,P=0.010;t=-4.859,P=0.017);Vimentin的表达明显降低(t=-6.244,P=0.008),E-cadherin明显升高(t=7.697,P=0.005).结论 STIP1调控ID3表达促进胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮-间充质转化.
关键词： 胃癌 应激诱导磷酸化蛋白1 分化抑制因子3 上皮-间充质转化 -
分化抑制因子3在胚胎植入中的作用
目的:检测分化抑制因子3(inhibitors of differentiation 3,Id3)基因在小鼠早期妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型中子宫内膜中的表达规律;探究Id3基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用.方法:应用Western blot及qRT-PCR检测Id3在早期妊娠和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;利用分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化、过表达Id3基因,分析Id3对基质细胞蜕膜化的影响.结果:Id3在小鼠早期妊娠模型中高表达于子宫内膜容受期形成阶段(孕第4天)(P蛋白质=0.001,PmRNA=0.001),胚胎着床后基质细胞发生分化的蜕膜化子宫中表达较低(PD5蛋白质=0.026,PD5mRNA=0.038);体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Id3的表达明显低于未发生蜕膜化的对照子宫(P白质=0.005,PmRNA=0.000);体外人工诱导蜕膜化可抑制Id3基因的表达(P蛋白质=0.000,PmRNA=0.001);过表达Id3可以明显降低体外子宫内膜基质细胞蜕膜化过程;Stat3信号参与调控Id3的表达调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程.结论:Id3参与小鼠胚胎植入并调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程.
