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川芎嗪对培养大鼠星形胶质细胞在糖氧剥离损伤中的保护作用
目的探讨川芎嗪对离体大鼠星形胶质细胞在糖氧剥离损伤中的作用及可能机制.方法原代培养的新生SD大鼠前脑星形胶质细胞分为正常对照组、糖氧剥离模型组、川芎嗪小剂量干预组、川芎嗪大剂量干预组.利用糖氧剥离(OGD)建立星形胶质细胞"缺血再灌损伤"模型,分别使用小剂量和大剂量川芎嗪干预后,再测定各组细胞培养上清中一氧化氮(NO2-/NO3-)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度;四唑盐(MTT)比色试验测定星形胶质细胞活力;P65免疫组化检测胞核NF-κB移位比例判断其活化程度.结果川芎嗪干预组与模型组比较,NO分泌量、LDH漏出量和细胞活力下降均明显减少(P<0.01);P65胞核移位比例明显下降(P<0.01).结论川芎嗪对培养大鼠星形胶质细胞在糖氧剥离损伤中具有保护作用,其作用机制之一可能是通过抑制NF-κB活化,减少NO分泌实现的.
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体外小胶质细胞活化及MRP8表达关系的研究
目的 建立体外小胶质细胞糖氧剥离活化模型,并探讨小胶质细胞活化与MRP8表达的关系.方法 体外培养大鼠原代小胶质细胞,糖氧剥离(OGD)法建立小胶质细胞活化模型,通过形态学观察、MTT法检测不同OGD时间点小胶质细胞活力改变,实时荧光定量PCR法检测不同时间点小胶质细胞MRP8相对表达量.结果 小胶质细胞OGD培养5min后细胞开始活化,活力较正常对照组明显增加(P＜0.05),且在10min组细胞活力大,OGD培养15min、30min、60min后细胞活力明显下降(P＜0.05).MRP8在小胶质细胞中表达随着OGD时间延长先增加后降低,在10min组达高峰(P＜0.05).结论 首次在体外证实活化的小胶质细胞表达MRP8增加,这可能是其参与多种中枢神经系统疾病发病的机制之一.
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人参皂甙对培养小鼠皮层神经细胞在糖氧剥离损伤中的保护作用
目的研究人参皂甙(GS)的三种单体成分GSRb1、GSRb3、GSRg1对离体培养的小鼠皮层神经细胞在糖氧剥离损伤中的保护作用.方法原代培养的小鼠胎鼠大脑皮层神经细胞分为正常对照组、糖氧剥离模型组、GSRb1、GSRb3、GSRg1干预组.利用糖氧剥离(OGD)建立皮层神经细胞缺血/再灌注损伤模型,分别用60 μmol/L GSRb1、GSRb3、GSRg1干预后,再测定各组细胞培养上清液一氧化氮(NO-2/NO-3)、乳酸脱氢酶(LDH)、四唑盐(MTT)比色试验测定神经细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 GSRb1、GSRb3、GSRg1干预组与模型组比较,NO分泌量、LDH漏出量、细胞活力、细胞凋亡率均明显减少( P＜ 0.01).结论 GSRb1、GSRb3、GSRg1对培养小鼠皮层神经细胞在糖氧剥离损伤中具有保护作用,其可能机制之一是通过拮抗兴奋性氨基酸毒性,减少NO分泌实现的.
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克拉霉素对糖氧剥离大鼠皮质神经细胞的保护作用及其抑制凋亡的机制研究
目的 研究克拉霉素对大鼠皮质神经细胞糖氧剥离(oxygen glucose deprivation,OGD)后的保护作用及其与抑制凋亡相关的作用机制.方法 消化法提取原代大鼠皮质神经细胞,建立皮质神经细胞OGD模型,OGD前予以克拉霉素(clarithromycin,CAM)预处理;通过存活/凋亡检测试剂盒于荧光显微镜下观察各组细胞凋亡情况;试剂盒测定各组培养基LDH含量定量评估细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法测定各组细胞caspase-3,Bax,Bcl-2的表达情况.结果 OGD处理后皮质神经细胞凋亡及乳酸释放含量较正常组明显增加(P＜0.01),100 μmol·L-1 CAM预处理可显著减少OGD造成的细胞凋亡及LDH释放(P＜0.01);OGD处理后皮质神经细胞caspase-3,Bax/Bcl-2表达显著升高(P＜0.01),而CAM预处理有效降低了caspase-3,Bax/Bcl-2表达.结论 克拉霉素对糖氧剥离大鼠皮质神经细胞具有保护作用,其作用可能与抑制了凋亡相关通路有关.
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糖氧剥离对海马神经元Furin、BDNF表达水平的影响
目的 探讨海马神经元在糖氧剥离时原蛋白转化酶Furin是否介导了脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平的变化.方法 通过OGD模拟缺血缺氧诱导海马神经元,采用免疫印迹观察OGD诱导后不同时间点BDNF、Furin动态表达水平变化.结果 海马神经元经OGD诱导后再灌注12h内BDNF表达水平下调约30％ (P＜0.01);再灌注24 h BDNF表达水平下调50％ (P＜0.01);再灌注48 h其下降约70％,72 h下调70％;与对照组比较有明显差异(P＜0.001).Furin表达水平呈进行性升高,即再灌注12h内Furin表达水平上调约1.3倍(P＞0.05);再灌注24 h时Furin表达水平上调2.1倍(P＜0.001);再灌注48 h其上调2.5倍,72 h上调3.14倍;与对照组比较有明显差异(P＜0.001).结论 经OGD诱导的海马神经元BDNF表达水平随再灌注时间呈进行性下降而Furin表达水平呈逐步上调.这一现象提示糖氧剥离时Furin未介导海马神经元内BDNF的细胞内分泌过程,在缺血缺氧时BDNF复杂的酶切过程有待进一步研究证实.
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辛伐他汀对PC12细胞糖氧剥离损伤的保护作用及其机制探讨
目的 探讨不同浓度的辛伐他汀干预对PC12细胞糖氧剥离损伤的保护作用及其作用机制.方法 对PC12细胞进行1 h的缺糖缺氧损伤和24 h的再灌注操作,并在损伤前1 h加入不同浓度的辛伐他汀进行干预,并观察PC12细胞的形态和结构,MTT测细胞活力,检测一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度.结果 PC12细胞在1 h的缺糖缺氧损伤和24 h的再灌注后与对照组比较,其细胞的突起减少或消失,细胞肿胀变圆,聚集成团;给予辛伐他汀干预的PC12细胞能够明显对抗糖氧剥离和再灌注的影响;对照组和糖氧剥离+不同浓度的辛伐他汀组的细胞活性均明显高于糖氧剥离组(P<0.01);对照组和糖氧剥离+不同浓度的辛伐他汀NO、IL-1β和TNF-α的浓度均低于糖氧剥离组(P<0.01).结论 通过对PC12细胞进行1 h的缺糖缺氧损伤和24 h的再灌注操作,能够较好地模拟神经细胞在缺血和再灌注后的状态;通过加入不同浓度的辛伐他汀进行干预,能够明显保护PC12细胞糖氧剥离和再灌注的损伤.
