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vjbR基因文献资料
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羊布氏菌vjbR基因的克隆及原核表达
目的 克隆并原核表达羊布氏菌强毒株16M vjbR基因.方法 PCR扩增羊布氏杆菌16M株vjbR基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒pET-28a-vjbR,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经His Trap FF纯化后,进行Western blot分析.结果 扩增的vjbR基因大小为708 bp,与预期一致；重组原核表达质粒pET-28a-vjbR经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,诱导4h表达量可达6.84 mg/ml;纯化的重组蛋白纯度为65.7％,能被羊布氏杆菌阳性血清所识别.结论 成功在大肠杆菌中表达了羊布氏菌VJBR蛋白,为其功能的研究、羊布病诊断试剂盒的研制及亚单位疫苗的研发奠定了基础.
