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微波固相吸附法制备临床标本中DNA和RNA
众所周知,PCR技术的应用是当今生物学研究领域的热点.将PCR用于感染性疾病的临床诊断,使医学微生物检验技术产生了新的飞跃.然而,如何保证PCR免受临床样品多样性、复杂性的影响,而获得准确的诊断结果乃是国内外同行正在致力解决的难题.对于临床标本处理好坏的结果是保证PCR质量的前提和基础.采用经典的酚-氯仿方法从临床标本中提取核酸,操作复杂费时,且增加标本间的交叉污染的机会.因此,简化PCR模板制备,探讨一种适用于临床诊断的简便和高效的核酸提取方法具有实际意义.本文根据文献报道建立并改进了微波固相吸附法快速提取核酸(DNA和RNA)的方法.
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血清HCV RNA不同提取方法的对比研究
目的:探讨不同方法提取丙型肝炎患者血清HCV RNA ,比较每种方法提取的RNA用于RT-PCR荧光定量检测的敏感度.方法: 分别采用异硫氰酸胍-酚氯仿法、蛋白酶K-酚氯仿法、固相吸附法、柱式总RNA抽提法提取7例疑似 HCV感染者血清标本中的HCV RNA,采用实时荧光定量PCR法进行检测.结果:采用异硫氰酸胍-酚氯仿法、蛋白酶K-酚氯仿法提取HCV RNA用于核酸检测有漏检现象,而采用固相吸附法和柱式总RNA抽提法,敏感度均可达到100%.结论采用固相吸附法和柱式总RNA抽提法提取血清HCV RNA具有较高的敏感度,在实时荧光定量PCR法检测中具有重要的临床价值.
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饮用水痕量有机污染物的GC/MS法测定
目的:饮用水中有机污染物对人体健康的危害受到全世界的广泛关注,目前已在饮用水中发现的有机污染物达1 000种以上.
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探讨两种核酸提取方法对HCV－RNA检验结果的影响
目的：探讨氯仿－异丙醇法和固相吸附法两种核酸提取方法对HCV－RNA检验结果的影响。方法按照随机原则将100例丙型肝炎患者分成对照组和实验组各50例，对照组患者利用氯仿－异丙醇法来对血清核酸进行提取，实验组患者则通过固相吸附法来对血清核酸进行提取。结果对照组所提取的核酸在经过1倡104倍稀释后，能进行荧光定量PCR 检测，进一步稀释则不能检测。实验组所提取的核酸在经过1倡105倍稀释后，能进行荧光定量PCR 检测，进一步稀释则会小于检测限。实验组检测阳性率84．0％（41／50）显著高于对照组检测阳性率68．0％（34／50），两者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。两种核酸提取方法在血红蛋白浓度为5g／L 时，抗干扰能力比较差异无统计学意义（＞0．05）；两种核酸提取方法在血红蛋白浓度为50g／L时，抗干扰能力比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论在进行核酸提取时，固相吸附法所提取的 HCV －RNA阳性率和灵敏度更高，抗干扰能力能更加理想。
