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084恶性疟原虫子孢子和无性期红细胞结合蛋白(MAEBL)的鉴定、表达和功能研究
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090病毒表达的重组单链抗体阻断鸡疟原虫子孢子感染埃及伊蚊唾腺
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荧光定量PCR用于按蚊体内疟原虫子孢子检测的研究
目的 建立一种用于按蚊体内疟原虫子孢子定量检测和虫种鉴别的荧光定量PCR方法.方法 采用针对4种人体疟原虫18S rRNA基因属特异性保守区的1对引物,以疟原虫18S rRNA基因重组质粒与按蚊DNA的混合物为模板,进行反应体系和反应条件优化,验证方法的特异性,并通过熔解曲线分析进行虫种鉴别.应用阴性按蚊DNA稀释的间日疟原虫18S rRNA基因重组质粒为模板制作标准曲线,并分别以质粒DNA和实验室子孢子感染阳性的按蚊DNA为模板分析建立的荧光定量PCR方法的敏感性.在反应体系中加入不同部位、不同用量按蚊DNA,以探讨按蚊DNA对检测效果的影响.结果 该方法对按蚊、人血DNA均无扩增,对4种疟原虫DNA均有特异性扩增且扩增产物的熔解温度(Tm)易于区分,三日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫的Tm值分别为71.0、72.7、73.9℃和75.9℃.标准曲线中循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的相关性(相关系数r=-0.99).低可以检出含50拷贝的质粒DNA或32倍稀释的子孢子阳性按蚊DNA样本.按蚊DNA对荧光定量PCR反应具有抑制作用.荧光定量PCR的Ct值在实验内和实验间均具有良好的重现性.结论 新建立的SYBR Green Ⅰ染料荧光定量PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于按蚊体内疟原虫子孢子的检测,并可同时对4种人体疟原虫进行鉴别.
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斑须按蚊体内柏氏疟原虫子孢子感染能力的实验研究
目的研究斑须按蚊体内柏氏疟原虫子孢子的感染能力. 方法收集并计数感染后不同时间蚊唾液腺内子孢子数;收集感染后第20天蚊胃部、体腔和唾液腺内的子孢子及感染后第34天唾液腺内的子孢子,按不同的子孢子量分组经尾静脉注入小鼠体内,检查各实验组小鼠疟原虫感染状况.结果 1.感染后第14天,在唾液腺内发现子孢子.子孢子的密度在第20天出现一小峰,第30天达高峰,而后迅速下降.2.经尾静脉注入30个子孢子即可在小鼠体内检出红内期疟原虫.3.唾液腺及体腔内的子孢子均可使小鼠感染疟疾.4.感染后第34天唾液腺内的子孢子未能使小鼠感染疟疾.结论不同发育时期唾液内的子孢子感染力具有差异,成熟囊合子内的子孢子尚需进一步分化、成熟才能获得感染能力.
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CD81分子在疟原虫子孢子入侵宿主肝细胞中的作用
子孢子侵入肝细胞是疟疾感染的关键,但对子孢子如何进入肝细胞研究甚少.近的研究证实,CD81是疟原虫子孢子通过纳虫空泡形成途径进入肝细胞的关键分子.研究表明,CD81可能不是子孢子的直接受体蛋白,而是子孢子通过特异性配体-受体入侵肝细胞中多受体复合物组成成分之一,或是子孢子与肝细胞结合后启动的一系列分子变化中的一个重要成分.本文阐述了CD81分子的化学结构特点和在疟原虫感染中作用机制的相关研究进展.
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肝细胞生长因子信号途径激活促进疟原虫子孢子感染
目的 研究肝细胞生长因子及其信号通路激活与疟原虫肝细胞感染的关系.方法 采用ELISA和Western blot束检测肝细胞生长因子.用FITC标记的葡聚糖吸收测定法检测肝细胞损伤,通过免疫荧光法观察肝细胞生长因子的表达与损伤的肝细胞的关系.同时,采用免疫共沉淀的方法检测肝细胞生长因子及其受体信号通路的激活以及磷酸化.结果 疟原虫子孢子感染肝细胞后造成了肝细胞损伤,同时诱导了肝细胞生长因子的合成、表达和释放.肝细胞生长因子促使疟原虫子孢子感染肝细胞,肝细胞生长因子及其受体信号通路的激活是疟原虫子孢子感染肝细胞的必要前提.结论 肝细胞生长因子及其受体可能是疟疾治疗的潜在靶点.
