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人微 RNA-181a-5p 对胃癌细胞增殖转移能力的影响
目的：探讨人 miRNA-181a-5p 对胃癌细胞转移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量（qRT）-PCR 检测 miRNA-181a-5p 在胃癌细胞系 GC9811及其腹膜高转移细胞系 GC9811-P 中的表达。将 miRNA-181a-5p 的内源性人工合成模拟物 mimic 和无关阴性对照转染胃癌细胞系 GC9811分别作为上调组和上调对照组；将 miRNA-181a-5p 的 miRNA 抑制子和无关阴性对照转染胃癌腹膜高转移细胞系 GC9811-P 分别作为下调组和下调对照组。采用 MTT 比色试验、平板克隆形成试验、Transwell 体外迁移实验、划痕体外迁移实验和细胞凋亡实验以验证上调和下调 miRNA-181a-5p 后胃癌细胞的增殖、转移和凋亡能力的变化；采用蛋白质印迹法验证上调及下调 miRNA-181a-5p、基质金属蛋白酶（MMP）14蛋白质水平的表达变化。两样本均数之间的比较采用独立样本 t 检验，率的比较采用卡方检验。结果 qRT-PCR 结果显示，miRNA-181a-5p 在 GC9811中的相对表达量为（1.00000±0.02126），在 GC9811-P 中为（3.17561±0.10676），差异有统计学意义（t ＝34.620，P ＜0.01）。MTT比色法显示，上调组细胞增殖速率高于上调对照组，而下调组低于下调对照组。平板克隆实验显示上调组的克隆形成数和克隆形成率分别为234.00±10.12和46.8%，上调对照组为93.00±9.61和18.6%，差异均有统计学意义（t＝17.500，χ2＝12.27，P 均＜0.01）；下调组为51.00±7.96和10.2%，下调对照组为99.00±8.05和19.8%，差异亦均有统计学意义（t＝7.344，χ2＝9.51，P 均＜0.01）；Transwell 迁移实验结果显示，上调组迁移出微孔膜的细胞数为（164.00±19.31）个，高于上调对照组[（87.00±23.04）个，t＝4.436，P ＜0.05]；下调组为（157.00±11.50）个，低于下调对照组[（234.00±12.12）个，t＝7.982， P ＜0.05]。划痕实验显示，上调组的迁移距离比为2.09±0.18，上调对照组为1.27±0.23；下调组为1.15±0.15，下调对照组为1.67±0.12，上调组和下调组分别与其对照组比较，差异均有统计学意义（t＝4.863、4.689，P 均＜0.01）。凋亡试验结果显示上调组的凋亡率为（6.10±1.02）%，上调对照组为（9.10±2.13）%，下调组为（12.70±1.23）%，下调对照组为（8.70±2.54）%，上调组和下调组分别与其对照组比较差异均无统计学意义（P 均*0.05）。蛋白质印迹法结果显示上调组的灰度值为561.881±35.740，高于上调对照组的275.784±23.520；下调组为579.565±37.950，低于下调对照组的1312.760±51.270，差异均有统计学意义（t ＝11.580、19.910，P 均＜0.01）。结论 miRNA-181a-5p 在胃癌腹膜高转移细胞系 GC9811-P 中高表达；它可促进胃癌细胞 GC9811、GC9811-P 增殖与迁移的能力，有抑制凋亡的趋势。
关键词： 胃肿瘤 增殖转移 miRNA-181a-5p 基质金属蛋白酶 14 -
肿瘤相关基因N-myc、Fas、MTA1、nm23-H1对子宫内膜癌细胞增殖转移的影响
目的 探讨原癌基因N-myc、抑癌基因Fas、转移促进基因MTA1及转移抑制基因nm23-H1对子宫内膜癌细胞增殖转移的影响.方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测正常子宫内膜组织、子宫内膜腺癌未转移患者及转移患者标本各30例中N-myc、Fas、MTA1、nm23-H1的基因表达情况,并行比较分析.结果 (1)子宫内膜癌组织中N-myc、MTA1基因扩增水平均高于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义(均P＜0.05);(2)子宫内膜癌组织中Fas、nm23-H1基因扩增水平均低于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义(均P＜0.05);(3)转移子宫内膜癌组织中MTA1基因扩增水平均高于未转移组,nm23-H1基因扩增水平均低于未转移组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);(4)子宫内膜癌组织转移组与未转移组中N-myc、Fas基因扩增水平均具有差异性,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 N-myc、MTA1基因能促进子宫内膜癌的细胞增殖,Fas、nm23-H1基因能抑制子宫内膜癌的细胞增殖;MTA1基因可促进子宫内膜癌的细胞转移,nm23-H1基因可抑制子宫内膜癌的细胞转移.
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益气补肾方含药血清对人胃癌细胞SGC-7901增殖转移及CD44+EpCAM+干细胞比例的影响
目的 探讨益气补肾方含药血清对人胃癌细胞SGC-7901增殖转移能力及CD44+EpCAM+干细胞比例的影响.方法 分别以低、中、高不同浓度益气补肾方含药血清及空白血清干预人胃癌细胞SGC-7901.采用MTT法检测24,48,72 h细胞增殖抑制率,Transwell小室检测胃癌细胞迁移侵袭能力.采用5-氟尿嘧啶(5-Fu)共培养富集胃癌干细胞,流式细胞术检测药物干预后CD44+EpCAM+干细胞比例.结果 干预48,72 h后,益气补肾方组细胞增殖抑制率显著高于同时期阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,益气补肾方各组透膜细胞数显著降低,迁移能力受明显抑制,差异有显著统计学意义(P＜0.01).流式细胞术结果显示,终浓度为20μg·mL-1的5-Fu共培养24 h后,胃癌干细胞比例显著提升,益气补肾方干预后各组细胞中CD44+EpCAM+干细胞比例均下调,中、高浓度组与模型对照组相比,差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 益气补肾方含药血清能显著抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,并呈时间、剂量相关性,其抗转移作用可能与下调胃癌干细胞表面标志物CD44、EpCAM表达,降低CD44+EpCAM+干细胞比例有关.
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益气补肾方调控胃癌干细胞 niche 及Notch 信号通路抗转移分子机制研究
[目的]探讨益气补肾方调控胃癌肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSC）niche 及 Notch 信号通路抗胃癌增殖转移的分子机制，为临床应用提供实验依据。[方法]采用人胃癌细胞株 NCI-N87建立胃癌 CSC 富集裸鼠荷瘤模型。裸鼠随机分为阴性对照组、模型对照组、氟尿嘧啶组（5-Fu 组）、益气补肾方组（益气补肾组）及益气补肾方+氟尿嘧啶组（协同组）。每组药物干预6周，观察裸鼠体质量变化及瘤体生长情况，比较各组肿瘤增殖及远处转移情况；采用 ELISA 法检测瘤体血管内皮生长因子受体-1（vascular endothelial growth factor receptor-1, VEGFR-1）、骨桥蛋白（osteopontin, OPN）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α）、CXC 趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4, CXCR4）表达；采用免疫组化法检测肿瘤组织中 CD24、CD44、上皮细胞粘附分子（epithelial cell adhesion molecule，EpCAM）的表达；采用 Western blot 检测肿瘤组织 Notch1、Jagged1蛋白表达。[结果]给药6周后，益气补肾组、协同组及阴性对照组裸鼠体质量均明显重于模型对照组、5-Fu 组，差异均有统计学意义（P<0.01）；模型对照组与阴性对照组裸鼠的瘤体均重于5-Fu 组、益气补肾组及协同组，差异有统计学意义（P<0.01）。5-Fu 组、益气补肾组及协同组裸鼠的肝脏、腹壁、淋巴结及肺的总转移率明显少于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型对照组比，5-Fu 组、益气补肾组及协同组瘤体内 VEGFR-1、OPN、HIF-1α、CXCR4的表达下调，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。益气补肾组与协同组 CD24、CD44的表达均低于模型对照组及5-Fu 组，差异有统计学意义（P<0.05）。益气补肾组 EpCAM 的表达低于模型对照组及5-Fu 组，差异有统计学意义（P<0.05）。益气补肾组及协同组瘤体组织中 Notch1、Jagged1蛋白表达均低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]益气补肾方具有显著的抗胃癌细胞增殖转移的作用，其机制可能是通过调控 CSC niche 及 Notch 信号通路，进而下调胃癌 CSC 表面标志物 CD24、CD44、EpCAM 的表达，诱导胃癌 CSC 良性分化，从而降低瘤体内 CSC 比例。
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肿瘤相关基因N-myc、Fas、MTA1、nm23-H1对子宫颈癌细胞增殖转移的影响
目的 探讨原癌基因N-myc、抑癌基因Fas、肿瘤转移促进基因MTA1、转移抑制基因nm23-H1对子宫颈癌细胞增殖转移的影响.方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测正常子宫颈组织30例,子宫颈浸润癌(均为子宫颈鳞状细胞癌)未转移组及转移组标本组织各30例中N-myc、Fas、MTA1、nm23-H1基因表达情况并进行比较分析.结果 子宫颈浸润癌组织中N-myc、MTA1基因扩增水平均高于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P＜0.05)；子宫颈浸润癌组织中Fas、nm23-H1基因扩增水平均低于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P＜0.05)；子宫颈浸润癌组织转移组中MTA1基因扩增水平均高于未转移组,nm23-H1基因扩增水平均低于未转移组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；子宫颈浸润癌组织转移组与未转移组中N-myc、Fas基因扩增水平比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 N-myc、MTA1基因促进子宫颈癌细胞增殖,Fas、nm23-H1基因抑制子宫颈癌细胞增殖.MTA1基因促进子宫颈癌细胞转移,nm23-H1基因抑制子宫颈癌细胞转移,且N-myc、Fas基因表达与子宫颈癌细胞转移亦有相关性.
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熟地黄多糖靶向TNF-α/STAT3通路抑制鼻咽癌增殖转移的机制
目的 探讨熟地黄多糖耙向肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)/信号转导及转录活化因子3(activator of transcription 3,STAT3)通路抑制鼻咽癌增殖转移的机制.方法 以鼻咽癌CEN1细胞为研究对象,分别以50μg/mL(A组)、100μg/mL(B组)、400μg/mL(C组)和800μg/mL(D组)浓度的熟地黄多糖溶液处理,MTT实验绘制处理前、处理24、48和72 h的CEN1细胞增殖曲线,同期采用RT-PCR测定各组TNF-α、STAT3和Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)的mRNA转录水平,并采用Transwell小室体外迁移实验观察处理前和处理72 h CEN1细胞转移能力的变化.结果 不同浓度的熟地黄多糖处理,对鼻咽癌CEN1细胞的增殖具有抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性.不同浓度的熟地黄多糖处理,对鼻咽癌CEN1细胞的转移具有抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性.不同浓度的熟地黄多糖处理鼻咽癌CEN1细胞,B组、C组和D组TNF-α、STAT3和JAK的mRNA相对表达量随着时间的延长而降低,且其对TNF-α、STAT3和JAK的mRNA转录水平调控效果具有明显的剂量依赖性.结论 熟地黄多糖抑制鼻咽癌增殖转移具有一定的时间和剂量依赖性,而下调TNF-α、STAT3和JAK可能为其抑制鼻咽癌增殖转移的机制.
关键词： 熟地黄多糖 肿瘤坏死因子-α 信号转导及转录活化因子3 Janus蛋白酪氨酸激酶 抑制 鼻咽癌 增殖转移 机制 -
H19/miR-29b/LOX影响胶质瘤细胞侵袭能力的体外研究
目的 研究H19/miR-29b/LOX在胶质瘤细胞中的作用机制.方法 通过qRT-PCR、克隆形成实验、Transwell实验检测H19、LOX在胶质瘤细胞中的表达及增殖转移能力.通过荧光素酶实验和生物信息学方法探讨H19/miR-29b/LOX之间的相关性.结果 H19、LOX在胶质瘤中随着转移程度异常表达量越高,正向调控细胞的转移增殖能力.H19能够结合miR-29b,而且miR-29b能够潜在靶向LOX基因,同时H19可以负向调控miR-29b.结论 H19/miR-29b/LOX在胶质瘤细胞中相互作用,影响细胞增殖及迁移.
关键词： H19/miR-29b/LOX 胶质瘤细胞 增殖转移 -
miR-17-5p在胶质瘤细胞中的作用机制
目的 研究miR-17-5p在胶质瘤细胞中的作用机制.方法 通过qRT-PCR检测miR-17-5p在胶质瘤细胞中表达及克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术验证胶质瘤细胞的增殖迁移及放疗敏感性.结果 miR-17-5p在胶质瘤组织样本高于癌旁正常组织,在胶质瘤细胞系高于正常星状细胞.转染miR-17-5p mimics后,促进细胞增殖侵袭;转染miR-17-5p ASO后,降低细胞增殖和侵袭能力.转染miR-17-5p组胶质瘤细胞的凋亡细胞百分比显著低于对照组.结论 miR-17-5p在胶质瘤细胞中促进细胞增殖及迁移,同时具有降低胶质瘤细胞对放疗敏感性的作用.
