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转基因细胞株BaF3-RAE1ε诱导产生的MDSC的杀伤功能及对NK细胞功能的影响
目的:探讨表达NKG2D配体视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAElε)的原B细胞株BaF3诱导产生的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)的杀伤功能及对NK细胞功能的影响.方法:以小鼠原B细胞株BaF3为基础,构建表达空质粒的BaF3-mock对照细胞和表达RAE1ε的BaF3-RAE1ε细胞.将BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞分别注射小鼠后诱导产生CD11b+Gr-1+ MDSC,磁珠分选MDSC后与NK细胞共培养后,流式细胞术检测其对NK细胞表面NKG2D和CD107a表达的影响,ELISA法检测其对NK细胞分泌IFN-γ的影响.将MDSC分别与BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞共培养后,乳酸脱氢酶释放法检测其对靶细胞BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞的杀伤作用.结果:与BaF3-mock细胞相比,BaF3-RAE1ε细胞诱导产生的MDSC对NK细胞表面NKG2D和CD107a的表达没有明显影响(P＞0.05),对NK细胞分泌IFN-γ的水平也没有显著影响(P＞0.05).与BaF3-mock细胞相比,BaF3-RAE1ε细胞诱导产生的MDSC对靶细胞BaF3-mock和BaF3-RAE1ε的杀伤作用明显增强[(1.99±0.39)％ vs(8.63±1.45)％、(5.09±0.67)％ vs(17.33±0.41)％,P＜0.01].[(1.20±0.09)％vs(10.31±0.69)％、(5.52±1.64)％ vs(18.91±3.04)％,P＜0.01].结论:RAE-1ε增强MDSC对靶细胞的杀伤功能.
关键词： 视黄酸早期转录因子1ε 髓系抑制性细胞 NK细胞 -
NKG2D配体RAE1ε对乳腺癌细胞4T1衍生MDSC功能的影响
目的:探讨表达小鼠NKG2D配体之一视黄酸早期转录因子1s(retinoic acid early transcript 1s,RAE1ε)的原B淋巴细胞BaF3对乳腺癌细胞株4T1成瘤小鼠来源的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)功能的影响.方法:以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础,构建表达RAE1ε的BaF3-RAE1ε细胞以及表达空质粒的BaF3-mock对照细胞.通过4T1原位肿瘤模型诱导产生CD 11 b+Gr-1+MDSC,将BaF3-mock细胞和BaF3-RAE1ε细胞作为刺激细胞,分别与脾MDSC共培养,流式细胞术检测MDSC表面CD40、CD80、F4/80、CD11c的表达和MDSC内活性氧(ROS)的水平;ELISA法检测共培养上清液IL-10、IL-4和IFN-γ的含量;Griess法检测共培养上清液一氮化氮(NO)的浓度.磁珠分选共培养体系中的MDSC,检测裂解后精氨酸酶的活性;另外,将分选后的MDSC与抗CD3/抗CD28抗体活化的脾细胞共培养,CFSE法检测活化的CD3+CD8+T细胞增殖情况.结果:成功获得4T1原位肿瘤模型来源的小鼠脾MDSC.与BaF3-mock细胞相比,BaF3-RAE1ε细胞刺激对MDSC分泌IL-4、IFN-γ、IL-10和NO的水平没有明显影响(P＞0.05);对MDSC表达CD40、CD80、F4/80、CD11c和ROS也没有显著影响(P＞0.05).与BaF3-mock细胞相比,BaF3-RAE1ε细胞刺激显著提高MDSC的精氨酸酶活性(156.166±1.209 vs 110.135±7.356,P＜0.01),并明显增强MDSC对CD8+T细胞增殖的抑制作用.结论:RAE-1ε在体外增强4T1成瘤小鼠来源的MDSC的抑制功能.
关键词： 视黄酸早期转录因子1ε 髓系抑制性细胞 精氨酸酶 乳腺癌4T1细胞 -
转基因细胞株BaF3-mb15-RAE对IKDC功能分子表达的影响
目的:探讨单独或共同表达视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)和膜型IL-15的B淋巴细胞BaF3对小鼠产生IFN的杀伤性DC(IFN producing killer DC,IKDC)功能分子表达的影响.方法:以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础,分别构建表达膜型IL-15的BaF3-mb15细胞和表达RAE1ε的BaF3-RAE细胞及同时表达膜型IL-15和RAE1ε的BaF3-mb15-RAE细胞.通过体外细胞因子诱导产生骨髓来源的小鼠成熟DC,将丝裂霉素灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别与DC共培养,流式细胞术检测其对DC中CD11clowB220+NK1.1+IKDC比例和DC表面CD40、CD80表达的影响.流式细胞术分选DC中的IKDC,将丝裂霉素灭活后的3株BaF3工程细胞株与其共培养24 h,流式细胞术检测共培养对IKDC表面CD40、CD80、CD86、NKG2D、MHCⅡ类分子、CD107a和FasL表达的影响.结果:成功获得骨髓来源的小鼠成熟DC.与BaF3-mb15细胞和BaF3-RAE细胞相比,BaF3-mb15-RAE细胞刺激显著提高DC中IKDC比例[(50.0±5.6)％ vs(30.3±8.2)％、(36.0±4.6)％,均P＜0.05],并且有效刺激IKDC表面CD40(180.1±28.2 vs 44.7 ±7.8、36.0±3.1,P＜0.01)和FasL(P＜0.05)表达上调;与BaF3细胞和BaF3-mb15细胞相比,BaF3-mb15-RAE细胞有效刺激IKDC表面CD80(P＜0.05)表达上调,而3株BaF3工程细胞刺激均不影响DC表面CD40、CD80的表达(P＞0.05);同时,3株BaF3工程细胞对IKDC表面CD86、MHCⅡ类分子、NKG2D和CD107a的表达也没有显著影响(P＞0.05).结论:RAE-1ε和膜型IL-15协同作用可促进IKDC增殖并诱导其高表达CD40和FasL.
关键词： IL-15 视黄酸早期转录因子1ε 产生IFN的杀伤性DC FasL 肿瘤免疫 -
膜型IL-15联合RAE-1ε增强小鼠NK细胞的杀伤活性
目的:探讨视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE-1ε)和膜型IL-15对小鼠NK细胞杀伤功能的影响.方法:前期研究以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础构建了3株BaF3工程细胞株,即表达膜型IL-15的BaF3/mb15细胞、表达RAE -1ε的BaF3/RAE细胞和同时表达膜型IL-15和RAE-1ε的BaF3/mb15/RAE细胞.将γ射线灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别刺激小鼠NK细胞.流式细胞术检测刺激后NK细胞表面分子的表达,胞内染色法检测NK细胞穿孔素和颗粒酶B的分泌,流式细胞术检测NK细胞对小鼠淋巴瘤YAC1细胞的杀伤活性.结果:与BaF3/mb15和BaF3/RAE细胞相比,BaF3/mb15/RAE细胞可有效上调NK细胞表面CD25、CD44、FasL和CD107a的表达,但对穿孔素和颗粒酶B的分泌没有明显刺激作用.当效靶比为20:1时,BaF3/mb15、BaF3/RAE和BaF3/mb15/RAE细胞刺激后NK细胞对靶细胞YAC1的杀伤率分别为(39.7±2.9)％、(45.3±2.3)％和(59.0±6.9)％,均高于BaF3组的(28.3±1.5)％(P＜0.01),且BaF3/mb15/RAE组高于BaF3/mb15和BaF3/RAE组(P＜0.05).结论:膜型IL-15联合RAE-1ε可促进NK细胞活化并增强NK细胞的杀伤活性.
