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miR-129-5p通过HMGB1调控乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性
目的:探讨miR-129-5p通过调控高迁移率族蛋白B1基因(high mobility group box 1,HMGB1)影响乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇(paclitaxel,PTX)的敏感性.方法:采用脂质体转染技术将miR-129-5pmimics、HMGB1小干扰RNA (si-HMGB1)分别转染入MCF-7细胞,用PTX刺激培养细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后MCF-7细胞miR-129-5p和HMGB1 mRNA的表达,Western blotting检测转染后MCF-7细胞HMGB1蛋白的表达,CCK-8增殖实验检测转染后PTX对MCF-7细胞增殖的影响,流式细胞术检测转染后对PTX诱导MCF-7细胞凋亡的影响.结果:转染miR-129-5pmimics后,MCF-7细胞中miR-129-5p的表达水平明显高于阴性对照组细胞(P＜0.01);过表达miR-129-5p后可明显增强PTX抑制MCF-7细胞的增殖和诱导细胞凋亡的能力(均P＜0.05),并显著抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).转染si-HMGB1后,显著降低MCF-7细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05);干扰HMGB1表达进一步促进PTX抑制MCF-7细胞的增殖并诱导细胞凋亡(均P＜0.05).结论:miR-129-5p通过下调HMGB1的表达增强乳腺癌MCF-7细胞对PTX的敏感性.
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miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中表达下调的表观遗传学机制
目的:检测miR-129成熟体miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中的表达特点,探讨人脑胶质瘤组织中miR-129-2表达异常是否与miR-129-2启动子甲基化有关.方法:收集湘雅医院神经外科2013年10-12月收治的胶质瘤患者肿瘤组织21例、脑外伤患者非肿瘤脑组织标本21例.Real-time PCR检测脑胶质瘤组织和非肿瘤脑组织、脑胶质瘤细胞株和正常脑胶质细胞株中miR-129-5p的表达;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测胶质瘤组织中miR-129-2基因启动子甲基化的情况;亚硫酸氢盐硫化测序PCR(bisulfite-sequencing PCR,BSP)分析经甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)处理后的胶质瘤细胞miR-129-2基因启动子甲基化水平的变化,同时Real-time PCR检测miR-129-5p的表达变化.结果:miR-129-5p在人脑胶质瘤组织和细胞中表达显著低于非肿瘤脑组织和正常脑胶质细胞(P＜0.05),胶质瘤组织中miR-129-2基因的启动子甲基化率显著高于正常脑组织(P＜0.05),使用5-Aza-dC去甲基化处理脑胶质瘤细胞后miR-129-2基因的启动子甲基化程度降低、miR-129-5p表达显著升高(P＜0.05).结论:miR-129-5p在脑胶质瘤中显著低表达,miR-129-2启动子甲基化是导致其低表达的机制之一.
关键词： miR-129-5p 脑胶质瘤 启动子 甲基化 -
miR-129-5p靶向调控VCP抑制骨肉瘤细胞体外迁徙侵袭
目的 探讨miR-129-5p是否靶向调控VCP基因抑制骨肉瘤细胞迁徙侵袭.方法 构建miR-129-5p过表达及低表达的慢病毒载体,转染骨肉瘤细胞U2-OS;采用实时荧光定量PCR检测上调及下调miR-129-5p的U2-OS细胞中miR-129-5p的表达量;采用RT-PCR和Western blot技术检测VCP mRNA和蛋白表达;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁徙、侵袭情况.结果 实时荧光定量PCR结果显示U2-OS细胞中miR-129-5p表达被明显上调或下调;RT-PCR和Western blot检测结果显示:miR-129-5p上调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照细胞组(阴性慢病毒转染);miR-129-5p下调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照细胞组;miR-129-5p上调U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著低于阴性对照细胞,miR-129-5p下调的U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著高于阴性对照细胞.结论 miR-129-5p靶向调控VCP的表达而抑制骨肉瘤细胞迁徙和侵袭能力.
关键词： 骨肉瘤 迁移 侵袭 miR-129-5p Vcp -
miR-129-5p在腹膜间皮细胞转分化中的作用与机制
目的 探讨miR-129-5p(microRNA-129-5p)对腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)的调节作用及可能的分子机制.方法 通过新开管腹膜透析(PD)和PD 6个月以上两组患者腹透流出液分离培养腹膜间皮细胞,采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测其中miR-129-5p的表达差异.5μg/L TGF-β1刺激腹膜间皮细胞株(HPMCs)0～72 h,观察TGF-β1对HPMCs细胞miR-129-5p表达的影响;预转染miR-129-5p前体(pre-miR-129-5p)使HPMCs中miR-129-5p过表达,再给予5μg/L TGF-β1刺激48 h,采用实时荧光定量PCR、Western印迹和细胞免疫荧光等方法,观察过表达miR-129-5p对TGF-β1诱导的HPMCs EMT相关蛋白和基因表达的影响.同时,观察5 μg/L TGF-β1作用不同时间(0～ 72 h)对HPMCsSmad作用蛋白1(SIP1,miR-129-5p生物预测下游因子)表达的影响以及过表达miR-129-5p对其mRNA和蛋白水平的调节作用.结果 PD 6个月以上组患者透出液分离培养的腹膜间皮细胞中miR-129-5p的表达显著低于新开管组(P＜0.01);5μg/L外源性TGF-β1刺激,可使HPMCs的miR-129-5p表达明显降低,呈时间依赖性,pre-miR-129-5p预转染可明显恢复TGF-β1诱导的上皮标志物E-cadherin mRNA和蛋白的表达,并抑制TGF-β1引起的间充质标志物Vimentin mRNA和蛋白的高表达(均P＜0.01).另外,TGF-β1可呈时间依赖性增加SIP1的mRNA和蛋白表达(均P＜0.01),而pre-miR-129-5p可明显抑制TGF-β1诱导的SIP1蛋白表达(P＜0.01),对其mRNA表达无明显影响(P＞0.05).结论 miR-129-5p可能参与PD状态下腹膜间皮细胞EMT,并可能通过转录后调控SIP1参与该过程,以miR-129-5p/SIP1为靶点,可望为PD腹膜纤维化防治提供一种新途径.
关键词： 腹膜透析 细胞转分化 miR-129-5p Smad作用蛋白-1 -
转录协同激活因子Yes相关蛋白与卵巢癌发生的研究进展
转录协同激活因子Yes相关蛋白(YAP)是Hippo信号通路主要的效应因子,位于染色体11q22扩增区上,相对分子量为65 Kda,大量研究发现,YAP在卵巢癌中高表达,且具有促进卵巢癌细胞增殖、抑制凋亡、产生耐药性、维持卵巢癌干细胞多潜能性的作用.随着对YAP研究的深入,发现多种因素共同参与调节YAP介导的卵巢癌进展,其中包括溶血磷脂酸(LPA)和表皮生长因子受体(EGFR)参与信号通路间的相互协作,以及微小RNA(miRNA)的miR-129-5p在转录水平上通过直接靶向调控YAP基因,进而影响卵巢癌的发生发展.研究显示靶向YAP有望成为卵巢癌的治疗手段,下调YAP表达或许成为治疗卵巢癌的新策略.
