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PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以不同浓度的渥曼青霉素作用于人类髓细胞白血病细胞K562,采用MTT法检测细胞增殖活性,单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤形成的"彗星"样拖尾现象,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡,Western blotting、RT-PCR检测渥曼青霉素作用K562细胞后总Akt和磷酸化Akt以及NF-κB基因及蛋白表达水平的变化.结果: 渥曼青霉素以时间-剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,其24 h的IC_(50)是25 nmol/L.渥曼青霉素诱导K562细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量依赖性增强.渥曼青霉素作用后K562细胞DNA链断裂,呈现"彗星"拖尾现象,其尾长与拖尾率显著高于对照组(P<0.01).渥曼青霉素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制磷酸化Akt以及NF-κB表达,但对总Akt蛋白没有明显影响.结论: 渥曼青霉素以时间和剂量依赖方式明显抑制K562细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能与其下调磷酸化PI3K/Akt信号通路以及NF-κB蛋白表达有关.
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GSK-3β抑制剂对肾移植冷缺血再灌注损伤的保护作用
目的 分析GSK-3β抑制剂TDZD-8对大鼠肾移植缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中NF-κB的活化、炎症反应和氧化应激的作用.方法 选用250 ～ 280 g雄性SD大鼠,建立大鼠肾移植模型和冷IRI模型.肾移植模型:将大鼠分为假手术组、肾移植组、肾移植+5 mg/kg TDZD-8组和肾移植+1 mg/kg TDZD-8组,每组6只;冷缺血再灌注模型:将大鼠分为假手术组、IRI组、IRI+5mg/kgTDZD-8组和IRI+1 mg/kg TDZD-8组,每组6只.采用Western blot和IHC检测两个模型各组大鼠p-RelA/p65、p-GSK-3β、GSK-3β、RelA/p65变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、SOD和MDA的变化;HE染色观察肾脏的病理改变,进行肾小管坏死评分;检测血清肌酐和尿素氮.结果 与假手术组相比,肾移植组或冷IRI组血清肌酐、尿素氮、TNF-α、IL-1β和MDA活性明显增高(P＜0.01),血清SOD活性降低(P＜0.01),肾小管坏死评分明显升高(P＜0.01);免疫组化检测结果显示p-GSK-3β和p-RelA/p65磷酸化水平上调(P＜0.01),Western blot检测结果显示NF-κB p65活性升高和GSK-3β活性降低(P＜0.01),病理损伤加重.使用TDZD-8干预后,大鼠血清肌酐、尿素氮、TNF-d、IL-1β和MDA活性降低(P＜0.05),血清SOD活性升高(P＜0.05),肾小管坏死评分降低(P＜0.05);免疫组化检测结果显示p-GSK-3β和p-RelA/p65磷酸化水平下调(P＜0.05),Western blot检测结果显示NF-κB p65活性降低并且GSK-3β活性增高(P＜0.05),病理损伤减轻.结论 GSK-3β抑制剂能降低NF-κB活性,下调NF-κB的磷酸化,减少下游炎症因子的释放,减轻肾脏病理和氧化应激损伤,减轻肾移植缺血再灌注损伤.
