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硒代甲硫氨酸联合5-氟尿嘧啶对人胃癌MKN-45细胞的协同抑制作用
目的:研究硒代甲硫氨酸(selenomethionine,SeMet)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人胃癌MKN-45细胞的抑制作用,并初步探讨其可能的作用机制.方法:采用不同浓度的SeMet与5-FU单独或联合作用于MKN-45细胞.细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖的抑制率,并采用Chou-Talalay联合指数法分析两药之间的相互作用;FCM法检测细胞的凋亡率;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞中p53、p21、p27及细胞周期蛋白cyclin D1的表达水平.结果:不同浓度的SeMet与5-FU单药或联合干预后,MKN-45细胞的增殖均明显受到抑制(P值均＜ 0.01),并呈剂量依赖性,两药有协同作用.SeMet与5-FU联合用药组较空白对照组和各单药组细胞的凋亡率增加,迁移及侵袭能力降低(P值均＜ 0.01).联合用药组的p53、p21和p27蛋白的表达水平均较空白对照组和各单药组明显上调(P值均＜ 0.01),而cyclin D1的表达水平明显下调(P值均＜0.01).结论:SeMe联合5-FU能协同抑制人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移及侵袭,促进凋亡,其机制可能与调节MKN-45细胞中p53、p21、p27及cyclin D1蛋白的表达水平有关.
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硒代蛋氨酸对中波紫外线致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究硒代蛋氨酸对中波紫外线(UVB)致HaCaT细胞氧化损伤的影响及其可能机制.方法 培养HaCaT细胞,分为4组:①正常对照组,不做任何处理;②硒代蛋氨酸组:分别加入1、10、50、100、200 nmol/L和1μmol/L硒代蛋氨酸预孵育24h;③UVB组:30、60、90 mJ/cm2 UVB照射;④硒代蛋氨酸+UVB组:不同浓度硒代蛋氨酸预孵育24h后进行不同剂量UVB照射.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平.采用析因设计方差分析、单因素方差分析对数据进行统计学分析,多重比较采用LSD法.结果 析因设计方差分析结果显示,UVB照射对细胞增殖活性有抑制作用(F=128.04,P＜ 0.05),且随UVB强度增加,细胞增殖活性逐渐下降,组间差异有统计学意义(P＜0.05);硒代蛋氨酸预孵育对细胞增殖活性也有影响(F=5.95,P＜ 0.05),其中10 nmol/L～1μmol/L硒代蛋氨酸+UVB组与UVB组比较,细胞增殖活性显著升高(P＜ 0.05);UVB照射和硒代蛋氨酸对细胞增殖活性无明显交互作用(F=1.65,P＞ 0.05).30 mJ/cm2 UVB照射后,UVB组凋亡率(31.9％±2.67％)较正常对照组(4.1％±0.67％)显著升高(P＜0.05);而10、50、100、200 nmol/L和1μmol/L硒代蛋氨酸+30 mJ/cm2 UVB组凋亡率[依次为:(21.9±3.72)％、(17.2±1.67)％、(4.6±0.85)％、(7.5±1.86)％、(13.5±1.95)％]均较30mJ/cm2UVB组凋亡率显著下降(P＜0.05).30mJ/cm2UVB组与正常对照组相比,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P＜ 0.05);10 nmol/L ～1 μmol/L硒代蛋氨酸+30 mJ/cm2UVB组与30 mJ/cm2 UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降(P＜0.05).结论 硒代蛋氨酸可以减轻UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制与增强抗氧化酶活性、减少氧自由基有关.
