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丝裂原活化蛋白激酶ERKs和JNKs在脑缺血损伤中的差异激活及其调控机制
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPK)两成员ERK1/2和JNK1/2在全脑缺血损伤中的激活及其可能的分子机制.方法采用四动脉结扎模型诱导SD大鼠前脑缺血,免疫印迹的方法观察ERK1/2和JNK1/2蛋白激酶特异性Thr和Tyr双位点磷酸化的变化及NMDA受体选择性拮抗剂对其双磷酸化的影响.结果缺血诱导海马脑区MAPK家族蛋白激酶两成员显著去磷酸化,严重缺血(30 min)ERK1/2而不是JNK1/2活性反弹;缺血再灌注ERK1/2活性在15 min首先升至高而JNK1/2 1 h后才逐渐升至峰值(P＜0.05),24 h再灌注能诱导两者的再次激活,且氯胺酮能显著抑制缺血诱导的ERK1/2而不是JNK1/2的激活.结论前脑缺血明显诱导ERK1/2和JNK1/2的差异激活,提示两者可能分享不同的分子机制,其中ERK1/2的激活明显与NMDA受体功能上调有关.
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ERK对缺血缺氧性脑损伤后神经元凋亡的影响
目的 研究在缺血缺氧性脑损伤后细胞外信号调节激酶(ERKs)对神经元凋亡的影响.方法 建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为脑缺血组(缺血组和干预组)和假手术组,干预组于缺血前30 min尾静脉注入U0126溶液,缺血组尾静脉注入相同体积不含U0126的DMSO稀释溶液;2,3,5-氯化(或溴化)三苯四氮唑(TTC)染色显示梗死灶;应用免疫组织荧光化学法检测梗死灶周围神经元核心抗原(NeuN)的表达及通过TUNEL方法检测神经元凋亡,并做NeuN与TUNEL的双标;用免疫印迹(Western blot)方法观察损伤侧皮层NeuN、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和细胞周期蛋白E(CyclinE)蛋白的表达.结果 缺血组的梗死体积明显大于干预组,在假手术组未见梗死灶;缺血组大鼠NeuN阳性细胞数和NeuN蛋白表达明显少于假手术组,TUNEL阳性细胞数和CyclinD1和CyclinE蛋白表达明显高于假手术组(P＜0.05).干预组NeuN阳性细胞数和NeuN蛋白表达亦少于假手术组,但多于缺血组,TUNEL阳性细胞数和CyclinD1及CyclinE蛋白表达亦多于假手术组,但少于缺血组(P＜0.05).结论 ERK可通过对细胞周期的调控而对神经元凋亡产生影响,抑制脑缺血引起的pERK1/2磷酸化可部分抑制神经元凋亡,减少缺血梗死灶,对缺血性脑损伤起一定的保护作用.
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细胞外信号调节激酶对细胞周期调控的影响
目的:研究脑缺血后细胞外信号调节激酶(ERK)对细胞周期调控的影响。方法:建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型，随机分为脑缺血组（对照组及干预组）和假手术组。干预组于缺血前30 min尾静脉注入ERK阻滞剂U0126，对照组尾静脉注入相同体积不含U0126的DMSO稀释溶液。应用免疫组织荧光化学法观察细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)阳性细胞表达；免疫印迹(Western blot)检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、Cyclin D1和Cyclin E的蛋白表达；半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转录因子E2F mRNA的表达。结果:干预组Cyclin D1和Cyclin E阳性表达的细胞数较对照组显著减少(P＜0.05)；缺血对照组pERK1/2蛋白表达明显强于干预组(P＜0.05)，4h时间点表达为明显，12h时间点恢复到基线水平，Cyclin D1和Cyclin E表达6h开始升高，12 h表达为明显，干预组较对照组显著减弱(P＜0.05)；缺血对照组E2FmRNA的表达显著强于干预组和假手术组(P＜0.05)，以7d表达为明显。结论:ERK在大鼠脑缺血中发挥重要作用，抑制脑缺血引起的pERK1/2磷酸化可降低细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E和E2F的表达，即细胞外信号调节激酶可影响细胞周期的调控。
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细胞外信号调节激酶对大鼠局灶性脑缺血后细胞周期调控的影响
目的 研究脑缺血后细胞外信号调节激酶(ERKs)对细胞周期调控的影响.方法 建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,分为脑缺血组(对照组及治疗组)和假手术组.治疗组于缺血前30min尾静脉注入U0126溶液,对照组尾静脉注入相同体积不含U0126的DMSO稀释溶液.应用免疫组织荧光化学法观察细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和细胞周期蛋白E(CyclinE)阳性细胞表达:免疫印迹(Weaem blot)检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、CyclinD1和CyclinE的蛋白表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)观察转录因子E2F mRNA的表达.结果 治疗组CyclinD1和CyclinE阳性表达的细胞数较对照组显著减少(P<0.05);缺血对照组pERK1/2蛋白表达显著强于治疗组(P<0.05),4h时间点表达为明显,12h时间点恢复到基线水平,CyclinD1和CyelinE表达6h开始升高,12h表达为明显,治疗组较对照组显著减弱(P<0.05);缺血对照组E2F mRNA的表达显著强于治疗组和假手术组(P<0.05),以7d表达为明显.结论 ERKs在大鼠脑缺血中发挥重要作用,抑制脑缺血引起的ERK1/2磷酸化,可降低细胞周期蛋白CyelinD1、CyclinE和E2F的表达.即ERKs可影响细胞周期的调控.
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细胞外信号调节激酶系统(ERKs)在正常发育大鼠视皮层基因表达的研究
细胞外信号调节蛋白激酶(ERKs)是皮层神经元生长、发育和分化的
