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ppGalNacT2与B7-H3在胃癌患者组织中的表达及意义
目的 探讨胃癌患者组织中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNacT2)与共刺激分子B7-H3蛋白的表达及其临床意义.方法 用免疫组化染色法检测54例胃癌组织及相应的癌旁组织中ppGalNacT2与B7-H3蛋白的表达,分析两者的相关性及其与胃癌患者临床病理参数的关系.结果 胃癌患者癌组织中ppGalNacT2及B7-H3蛋白的阳性表达率分别为55.5％(30/54)及46.3％(25/54),明显高于相应的对照组[7.4％ (4/54)及9.2％ (5/54),x2=29.01,P＜0.05;x2=18.46,P＜0.05];在高、中度分化的胃癌患者ppGalNacT2及B7-H3蛋白的阳性表达率(11.1％,9.3％)均明显低于低分化者(44.4％,37％),差异有统计学意义(P均＜0.05).在胃癌组织中ppGalNacT2与B7-H3蛋白的表达水平呈正相关(r=0.46,P＜0.05).结论 ppGalNacT2与B7-H3均参与胃癌的发病,并与胃癌分化程度有关.
关键词： 胃癌 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2 共刺激分子 免疫 糖基化 -
多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-Acetylgalactosaminyltransferases,pp-GalNAc-T2, E.C.2.4.1.41)的mRNA表达谱研究
多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2是O-糖链合成第一步的糖基转移酶,而O-糖基化与血管内皮细胞的功能密切相关.随着近年来人类基因组计划的迅速发展,人们对糖基转移酶的功能也开始有了新的认识.本文采用RT-PCR法观察了六种不同组织中PP-GalNAC-T2的表达水平,发现PP-GalNAc-T2在胃肠道粘膜等呈高表达,在脑组织中也有一定的表达,提示它在不同组织中的分布与组织功能存在相关性,值得进一步研究.
关键词： 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2 O-糖基化 表达 -
多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测
目的:以人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)为研究对象,利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌(E. Coli)BL21中原核表达其编码序列,并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测.方法:首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,形成重组表达质粒pGEX-5X-3/T2.重组质粒转化大肠杆菌DH5α,测序鉴定后转化BL21,异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导后,表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白.对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖(Glutathione-Sepharose)4B亲和层析柱进行纯化.然后根据ppGalNAc-T2的催化功能,设计底物,建立酶促反应体系,利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活分析.结果:成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3/T2,通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达,利用亲和层析得到纯化的酶蛋白,并经Western印迹得以验证.反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰.结论:成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3/T2,ppGalNAc-T2全长编码序列被成功表达、纯化及复性,检测到具有酶活性.
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多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2真核表达载体的构建及在SHG-44细胞的表达
目的:为探讨O-糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用和功能,构建pcDNA3/ppGalNAc-T2真核表达质粒并转染人神经胶质瘤细胞SHG-44.方法:采用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至真核表达载体pcDNA-3.1,脂质体介导基因转染人神经胶质瘤细胞SHG-44细胞,采用RT-PCR法检测重组质粒的表达.结果:酶切图谱分析和基因测序证实pcDNA3.1-T2真核表达质粒构建成功.RT-PCR显示转染细胞有T2的表达.结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-T2,并成功转染入SHG-44细胞,为进一步研究ppGalNAcT2的功能奠定了基础.
