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基于核酸侵入反应的基因突变检测方法研究进展
肿瘤靶向药物治疗需要检测特异性的基因突变.尽管已开发出多种基于模板扩增的基因突变检测方法,但由于存在扩增产物交叉污染的风险,其应用受到极大限制.基于信号扩增的核酸侵入反应,由于不存在扩增产物污染的风险,并且具有良好的单碱基识别特异性,非常适用于基因突变的检测.因此,一系列基于核酸侵入反应的基因突变检测方法应运而生.综述若干基于核酸侵入反应的基因突变检测方法原理与应用研究.
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粪便中大肠癌特异性 NDRG4基因甲基化水平的超高灵敏定量检测法
目的：粪便中NDRG4基因的甲基化可作为一种无创检测大肠癌的标志物，但传统DNA甲基化检测方法因灵敏度低、特异性不高难以用于粪便样本的检测。文中旨在建立一种高灵敏、高特异的NDRG4基因甲基化定量检测方法（2－ΔCT法），并用于患者粪便DNA样本的检测。方法选择来自南京军区南京总医院的41例粪便样本，其中12例大肠癌、4例腺瘤、25例正常人样本。将核酸侵入反应与实时荧光PCR技术耦联，采用2－ΔCT法进行相对定量，建立高灵敏高特异的DNA甲基化检测方法，并用于41例粪便样本中NDRG4基因甲基化水平的检测。结果检测了6例大肠癌组织及4例FFPE样本中NDRG4基因甲基化水平，全部样本中均能测出NDRG4基因甲基化，甲基化水平范围为0．01％～6．09％。大肠癌、腺瘤患者及正常人中各有8例、4例、2例检测到甲基化信号，甲基化范围分别为0．06％（0～0．51％）、6．61％（0～23．06％）、6．30％（0～51．01％）。大肠癌、腺瘤患者中甲基化检出率（33．3％、50．0％）较正常人显著升高（4．0％），差异有统计学意义（P＜0．05）。结论2－ΔCT法可用于粪便样本中NDRG4基因甲基化水平的准确测定，为大肠癌的无创检测提供了有力工具。
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多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术检测病毒性脑炎脑膜炎病原体
目的 建立一种病毒性脑炎脑膜炎病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法.方法 针对几种重要的脑炎脑膜炎病毒(东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和尼帕病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应、核酸侵入反应及纳米金显色反应,对多种脑炎脑膜炎病毒同时进行检测,以森林脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、基孔肯雅病毒和登革病毒4种病原核酸评价其检测特异性,以体外转录的病毒RNA或扩增的PCR片段评价其检测敏感性,并对流行性乙型脑炎患者临床标本进行检测.结果 成功建立了一种脑炎脑膜炎病毒多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测技术.建立的检测方法可特异的检测目的病原体,且与森林脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、基孔肯雅病毒和登革病毒无交叉反应.该方法对不同靶标的检测灵敏度均为103拷贝/μL,临床标本检测结果均为阳性.结论 建立的脑炎脑膜炎病毒多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术的检测方法,具有较高的检测特异性及灵敏度,检测通量高,肉眼即可观察结果,在传染病病原体检测方面具有广阔的应用前景.
