首页 > 文献资料
-
脂联素对脂多糖诱导的 RAW264．7细胞NLRP3及炎症因子表达的影响
目的：探讨脂联素对脂多糖诱导的 RAW264．7细胞 NLRP3及炎症因子表达的影响。方法：取 RAW264．7细胞分为4组：空白对照组、脂多糖组、脂联素预处理组（脂联素组）、NLRP3拮抗组。RAW264．7细胞接种于35 mm培养皿中，除空白对照组外，其他组分别予以脂多糖、脂联素联合脂多糖以及脂多糖联合 NLRP3拮抗剂 Z-VAD-FMK孵育；蛋白质印迹法测定 NLRP3蛋白含量，实时 PCR 法测定 mtDNA 拷贝数，酶联免疫吸附试验检测 IL-1β及 IL-6水平。结果：与对照组比较，脂多糖组 NLRP3蛋白含量、mtDNA 拷贝数以及 IL-1β及 IL-6水平明显增加（P ＜0．05）；与脂多糖组比较，脂联素组及 NLRP3拮抗组各指标明显降低（P ＜0．05）。结论：NLRP3炎性小体参与脂多糖诱导的炎性反应，脂联素对脂多糖诱导的炎性反应的调控可能与抑制 NLRP3炎性小体活性、降低 mtDNA、IL-1β及 IL-6表达水平有关。
关键词： RAW264.7 细胞 脂多糖 脂联素 NLRP3 炎性小体 -
靶向沉默巨噬细胞中 Mcl-1基因 shRNA表达质粒的构建与鉴定
目的：研究髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因在小鼠巨噬细胞 Raw264.7和人巨噬细胞THP-1中的表达情况,筛选出表达含量高的细胞株作为实验用细胞,根据筛选的结果构建靶向小鼠 Mcl-1基因的短发夹 RNA(shRNA)真核表达质粒进行转染,后筛选出沉默 Mcl-1基因效果明显的 shRNA 表达质粒。方法利用半定量 RT-PCR 和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分别检测两种巨噬细胞中 Mcl-1mRNA 和蛋白表达情况。采用小分子干扰 RNA(siRNA)软件设计3个针对 Mcl-1基因不同位点的 shRNA 片段,由公司构建携带此 shRNA 片段的真核表达质粒(Mcl-1 shRNA1-3),然后通过脂质体将真核表达质粒载体转染到小鼠巨噬细胞株 Raw264.7中,24、48 h 后通过倒置荧光显微镜观察转染效果,并分别采用实时定量 PCR 和 Western blot 检测 Mcl-1 mRNA 和蛋白表达情况。结果小鼠巨噬细胞 Raw264.7中 Mcl-1的 mRNA 及蛋白质的表达显著高于人巨噬细胞,差异有统计学意义(P <0.05)；构建的 shRNA 表达载体在24、48 h 均能降低 Raw264.7细胞内 mcl-1 mRNA 和蛋白水平,尤其在48 h 沉默效果为明显；转染48 h 后与正常组、脂质体组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05)；与 Mcl-1 shR-NA1和 Mcl-1 shRNA2相比,Mcl-1 shRNA3对 Mcl-1 mRNA 和蛋白的沉默作用强。结论成功筛选出了实验所用细胞 Raw264.7及对小鼠巨噬细胞 Raw264.7内 Mcl-1具有明显沉默效果的靶向 Mcl-1 shRNA3真核表达质粒。
-
毛蕊异黄酮对脂多糖和γ干扰素诱导的RAW264.7细胞产生一氧化氮的影响
目的：探讨毛蕊异黄酮对脂多糖(LPS)和γ干扰素(INF-γ)诱导的 RAW264.7分泌一氧化氮(NO)的影响。方法LPS 和 INF-γ共同刺激生长良好的 RAW264.7细胞,并用不同浓度(25、50、100μmol /L)毛蕊异黄酮进行干预；MTT 法检测毛蕊异黄酮对 RAW264.7细胞的毒性作用；硝酸还原酶法检测细胞上清液中 NO 含量；实时定量 PCR法检测细胞中诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA 的表达水平。结果①25、50、100μmol /L 浓度的毛蕊异黄酮对RAW264.7细胞无毒性作用(P >0.05)；②LPS 和 INF-γ共同刺激 RAW264.7细胞后,细胞上清液中 NO 的含量明显增加(P <0.01)；毛蕊异黄酮进行干预后,NO 的含量明显下降,并呈现出浓度依赖性(P <0.01)；③用 LPS 和 INF-γ共同刺激 RAW264.7细胞后,细胞中 iNOS mRNA 的表达水平显著升高(P <0.01)；毛蕊异黄酮进行干预后,iNOS mRNA 表达水平显著降低,并呈现出浓度依赖性(P <0.01)。结论毛蕊异黄酮能抑制 LPS 和 INF-γ诱导的RAW264.7细胞产生 NO,其抗肿瘤作用可能与此有关。
关键词： 毛蕊异黄酮 RAW264.7 细胞 一氧化氮 一氧化氮合酶
