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甲基化CpG结合域文献资料
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甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定
目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白.方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达；镍亲和层析柱纯化重组蛋白.表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力.结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体.SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达.亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白.SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA.结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达.
关键词： 甲基化CpG结合域 甲基化CpG结合蛋白2 原核表达
