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缺氧对人肝癌细胞MHCC-97L迁移的影响
目的:研究缺氧对人肝癌细胞MHCC-97L迁移的影响,并初步揭示其分子机制.方法:建立划痕实验检测缺氧条件下人肝癌细胞MHCC-97L迁移能力变化的可靠模型,研究Wnt5a对MHCC-97L细胞迁移的调控.结果:缺氧使MHCC-97L细胞缺氧诱导因子1 α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt5a mRNA表达上调,并可促进MHCC-97L细胞迁移能力显著增强,干扰HIF-1α表达的MHCC-97L细胞在缺氧条件下Wnt5a mRNA表达显著降低,干扰Wnt5a表达的MHCC-97L细胞在缺氧环境中的迁移能力则明显降低.结论:在缺氧条件下MHCC-97L细胞迁移能力可发生明显改变,HIF-1α和Wnt5a调控其迁移过程.这些结果为深入阐明肝癌细胞转移和侵袭分子调控机制提供了新的实验线索.
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GPC3对肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响
目的 通过构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究GPC3对人肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响.方法 用基因重组及限制性内切酶技术构建并鉴定表达载体pEGFP-c3-GPC3,通过脂质体介导转染人肝癌细胞株MHCC-97L,流式细胞术和G418筛选建立稳定细胞株;采用荧光定量PCR、Western blotting分别检测MHCC-97L中GPC3 mRNA和蛋白的表达情况,并在荧光显微镜下观察细胞荧光;MTT法检测GPC3对肝癌细胞MHCC97-L体外增殖能力的影响.结果 经酶切及测序鉴定,确认成功构建真核表达载体pEGFP-c3-GPC3,荧光显微镜下观察到绿色荧光表达;从mRNA和蛋白水平证实,GPC3基因在转染后的MHCC-97L中成功表达;MTT生长曲线证实MHCC97-L/GPC3较其他两株细胞增殖显著加强(P<0.001).结论 成功构建pEGFR-c3-GPC3真核表达载体;筛选出稳定表达GPC3基因的MHCC97-L/GPC3细胞株;GPC3基因表达升高可促进肝癌细胞株MHCC97-L的增殖.
关键词： 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 绿色荧光蛋白 MHCC-97L 真核表达载体/构建 肝癌
