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S1000A16文献资料
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S100A16基因的原核表达和多克隆抗体制备
目的:构建S100A16原核表达载体,制备S100A16蛋白多克隆抗体并初步鉴定.方法:RT-PCR扩增得到小鼠肝脏组织的S100A16基因,将此片段克隆到带有His标签的原核表达载体pET-28a多克隆位点,并转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导融合蛋白表达,以亲和层析的方法纯化His-S100A16融合蛋白.纯化蛋白经SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫新西兰白兔制备抗血清.分别采用ELISA和Western blot方法检测抗体效价和特异性.结果:经双酶切和核酸序列分析证实成功构建pET-28a-S100A16原核表达质粒.考马斯亮兰染色结果证实IPTG可有效诱导融合蛋白表达.用纯化融合蛋白免疫新西兰白兔得到的S100A16抗体血清,经ELISA和Western blot检测结果显示该抗体效价高,特异性好.结论:构建带有His标签的S100A16原核表达载体,并获得高纯度His-S100A16融合蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究S100A16生物学功能奠定基础.
