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肿瘤坏死因子受体相关因子4对人脑胶质瘤细胞U87增殖、迁移和侵袭的影响及其机制
目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)对人脑胶质瘤细胞U87增殖、迁移和侵袭的影响.方法 运用小干扰技术RNA(siRNA)转染人脑胶质瘤U87细胞,分成阴性对照组(A组)和TRAF4-siRNA组(B组).检测TRAF4蛋白、MMP2、MMP-9、p-Akt和周期蛋白D1.应用CCK-8细胞增殖实验检测U87细胞的增殖能力.细胞划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验检测U87细胞的迁移、侵袭能力.结果 与A组比较,B组U87细胞中TARF4蛋白表达量降低,MMP-2、MMP-9、p-Akt和周期蛋白D1表达量均减少(P＜0.05),B组U87细胞增殖能力较低,细胞戈j痕宽度增大(P＜0.05).Transwell迁移和侵袭实验显示,B组穿过底层膜细胞数均少于A组[(167±5)个vs.(331±8)个和(155±5)个vs.(347±7)个](P＜0.05).结论 TRAF4-siRNA靶向干扰了TRAF4的表达,同时下调MMP-2、MMP-9、-Akt和周期蛋白D1的表达.TRAF4表达下调能降低人脑胶质瘤细胞U87增殖、迁移和侵袭的能力.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子4 胶质瘤 增殖 迁移 侵袭 -
TRAF4沉默对食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及细胞周期的影响
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)靶向沉默肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)基因表达对人食管癌细胞恶性行为的影响.方法 选取对数生长期Eca-109细胞并行脂质体法高效转染2条靶向沉默TRAF4的siRNA (si-TRAF4-1、siTRAF4-2),采用实时定量PCR检测转染后的TRAF4 mRNA水平以筛选沉默效果较好的siRNA为沉默组,同时设阴性对照组(转染阴性siRNA序列)和空白对照组.采用噻唑蓝(MTT)法检测转染24、48、72、96 h的吸光度值以计算各组增殖抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染、Caspase-3 FITC单染或PI单染流式细胞术检测转染后的凋亡率、Caspase-3活化率和细胞周期分布情况.结果 靶向沉默TRAF4 24～96 h内,转染siTRAF4-1、siTRAF4-2的Eca-109细胞中TRAF4 mRNA水平均低于未转染或转染对照siRNA的细胞,且转染siTRAF4-1、siTRAF4-2后的沉默率均高于转染对照siRNA的细胞(均P＜0.05);后续试验选取沉默率较高的siTRAF4-1进行研究.与空白对照组和阴性对照组相比,沉默组的增殖抑制率、凋亡率及Caspase-3活化率均升高,差异有统计学意义(均P＜0.05);沉默组转染96 h的G0/G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组,而S、G2/M期细胞比例低于其余两组,以上差异均有统计学意义(均P＜0.05);空白对照组和阴性对照组以上指标的差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 通过siRNA靶向沉默TRAF4基因表达的效果较好,可抑制细胞增殖并诱导凋亡、Caspase-3活化和细胞周期G0/G1期阻滞,为食管癌靶向治疗提供了方法学基础.
关键词： 小干扰RNA 肿瘤坏死因子受体相关因子4 食管癌细胞Eca-109 增殖 凋亡 -
RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究
目的 研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4(p90 ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor associated factor 4,TRAF4)在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR法检测RSK4和TRAF4在HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况.用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达.结果 RSK4 mRNA、TRAF4mRNA在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞,RSK4 mRNA、TRAF4mRNA在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性(rRSK4=0.92,P＜ 0.01;rTRAF4=0.82,P＜0.01);ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100.在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4表现出负相关(r1=-0.81,P＜0.01);在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4同样呈现出高度负相关(r2=-0.84,P＜0.01).结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用.
