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金雀黄素抑制人乳腺癌细胞系体外增殖作用机理的实验研究
目的研究金雀黄素抑制人乳腺癌细胞株体外增殖作用的机理. 方法选用2种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231体外培养,MTT法检测细胞增殖作用,Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,同时进行了原位细胞凋亡的检测. 结果金雀黄素对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体外生长具有明显的抑制作用.Giemsa染色显示,金雀黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变,细胞固缩、发泡,染色质凝集呈块状,并沿核周分布.流式细胞仪检测在G1峰前可见凋亡峰,且随用药时间的延长,凋亡比率递增.而金雀黄素处理的MDA-MB-231细胞未见明显的凋亡形态改变和凋亡峰的出现,细胞周期明显地阻滞于G2～M期. 结论金雀黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于G2-M期,从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖,为其减缓人乳腺癌细胞的体内生长提供理论依据.
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环氧化酶-2在人、大鼠乳腺癌及人乳腺癌细胞株的表达及其意义
目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在人、大鼠乳腺癌及人乳腺癌细胞株的表达及其意义.方法应用免疫组织化学、Western bloting、RT-PCR法检测人乳腺癌组织及配对的癌旁组织、大鼠致癌组、选择性COX-2抑制剂尼美舒利(NIM)组、人乳腺癌细胞株中COX-2的表达,MMT法检测细胞株的生长率.结果正常人、大鼠乳腺组织不表达COX-2 mRNA、蛋白,癌旁组织表达明显增高,肿瘤组织COX-2 mRNA、蛋白显著增高,NIM明显下调大鼠乳腺癌COX-2的表达;MDA-MB-231细胞COX-2呈强表达,MCF-7细胞不表达COX-2;NIM显著抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增生.结论 COX-2可作为预防乳腺癌的分子靶点;NIM对MDA-MB-231细胞的抑制更为有效,提示COX-2选择性抑制剂对ER(-)的乳腺癌有更好的预防作用,COX-2的分子靶向治疗将成为乳腺癌预防和治疗的新途径.
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金雀异黄素对人乳腺癌细胞体外增殖作用机制的研究
目的 研究金雀异黄素(Genistein,Gen)对人乳腺癌细胞株MCF -7凋亡的影响及凋亡相关 基因表达的调控.方法 选用人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养,MTT法检测Gen对乳腺癌生长活力 的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态学改变,免疫组化检测凋亡相关基 因Bax和癌基因erbB-2蛋白表达水平的改变.结果 金雀异黄素对MCF-7细胞体外生长具有明显的 抑制作用.Giemsa染色显示,金雀异黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变,细胞固缩、发泡,染色质凝集呈块状,并沿核周分布.流式细胞仪检测在G1峰前可见凋亡峰,且随用药时间的延长,凋亡 比率递增.蛋白水平检测表明金雀异黄素促进MCF-7细胞Bax表达升高,抑制erbB -2蛋白的表达. 结论金雀异黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于G2～M期,从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖,并主要 是通过调节Bax和erbB -2蛋白的表达实现的.
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中药复方“益肾固冲汤”对人乳腺癌细胞株 MCF－7增殖及凋亡的影响
目的：探讨益肾固冲汤抑制乳腺癌细胞增殖，促进其凋亡的作用和抗癌分子的机制。方法体外培养人乳腺细胞株（ MCF）－7细胞利用 MTT 法观察益肾固冲汤对人乳腺癌 MCF－7细胞增殖的抑制作用，用流式细胞仪检测益肾固冲汤对人乳腺癌 MCF－7凋亡及细胞周期的影响。结果益肾固冲汤对人乳腺癌 MCF－7细胞增殖具有抑制作用，都具有明显的时－效和量－效关系。人乳腺癌细胞 MCF－7细胞经过不同浓度的益肾固冲汤处理24、48、72 h 后，各组均呈现不同程度的凋亡，且凋亡率随着计量的增加、时间的延长而逐渐增加。益肾固冲汤在40μg ／ml 量、作用72 h时具有统计学差异，细胞凋亡率高，达17．93％，与正常对照组相比，G0／G1期细胞比率随作用时间延长在逐渐减少，G2／M 期的细胞比率随作用时间延长在逐渐增加，细胞生长周期较明显停滞在 G2／M 期，具有明显时间依赖性。结论益肾固冲汤可以抑制人乳腺癌 MCF－7细胞的增殖，诱导细胞凋亡，具有明显的量效和时效关系。细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用与 G2／M 期有关。
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瘦素作用于人乳腺癌SK-BR-3细胞的可能机制
目的 观察瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及对VEGF表达的影响,探讨其可能机制.方法 不同浓度瘦素与人乳腺癌SK-BR-3细胞共同培养后,CCK-8法检测其对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测VEGF mRNA及蛋白表达情况.结果 在一定范围内,瘦素呈时间、剂量依赖性促进SK-BR-3细胞的生长(P＜0.05)；细胞受不同浓度瘦素作用后VEGF mRNA及蛋白表达量明显增加并具有剂量依赖性(P＜0.05).结论 在体外瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞有明显增殖作用,通过促进VEGF的表达,在促进血管的生成及肿瘤转移机制中可能发挥一定作用.
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叶酸缺乏对人乳腺细胞株生长影响的实验研究
将人乳腺细胞株HBL-100和人乳腺癌细胞株MCF-7置于叶酸缺乏的培养基中培养,利用细胞计数和流式细胞仪(FCM)判断叶酸缺乏情况下,乳腺癌的发生及生长,探讨叶酸缺乏与乳腺癌发生之间的关系.
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陈皮多甲氧基黄酮类成分对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株增殖抑制作用及其敏感性比较
目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人乳腺癌、肝癌细胞株的增殖抑制作用并对其敏感性进行比较.方法:采用MTT法观察CM对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的增殖抑制作用.结果:不同剂量CM(10mg/L、20mg/L、40mg/L)作用于MCF-7细胞株,24h细胞抑制率分别为18.75%、19.79%、34.38%,48h细胞抑制率分别为17.39%、36.96%、40.22%,72h细胞抑制率分别为35.57%、47.08%、50.69%;作用于HepG2细胞株,24h细胞抑制率分别为5.51%、11.81%、29.92%,48h细胞抑制率分别为13.54%、38.54%、51.04%,72h细胞抑制率分别为13.21%、43.40%、55.67%.结论:CM可以抑制人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的生长并对两细胞株的增殖抑制呈现时间、浓度依赖性.同等条件下,在小剂量、短时间作用时,MCF-7对于CM作用的敏感性较高;在大剂量、长时间作用时,HepG2表现出比MCF-7更高的敏感性.
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胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-543生长的增殖作用
目的 探讨胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-543生长的增殖作用.方法 将胰岛素直接作用于体外培养的人乳腺癌细胞株(MDA-MB-543),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期分布.结果 胰岛素在1～ 10 mU/mL浓度范围内和作用时间2～16 h范围内,对MDA-MB-543增殖作用逐步增强,反映增殖活性的S期和G2/M期细胞比例逐渐增多,其中S期细胞比例与对照组比较有显著性差异(均P＜0.05或0.01).结论 胰岛素能加快诱导MDA-MB-543细胞进入细胞周期S期增殖,呈剂量和时间依赖关系,但是短暂和可逆的.
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葛根素糖苷生物合成及对乳腺癌细胞增殖抑制的影响
目的 研究约氏不动杆菌G2菌株对葛根素糖苷生物合成的佳转化条件,以及葛根素糖苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖抑制作用.方法 考察生物合成体系中转化温度、pH和蔗糖浓度对转化率的影响;并以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)观察不同浓度的葛根素及葛根素糖苷对MDA-MB-231细胞生长的影响.结果 葛根素糖苷的佳转化条件为温度30℃,pH 7.38,蔗糖浓度60 g/L,在此条件反应24 h,转化率为85％.MTT法显示,不同浓度的葛根素及其糖苷对MDA-MB-231细胞均有抑制作用,并随浓度升高而抑制作用增强;其中200 μmol/L浓度葛根素及葛根素糖苷作用MDA-MB-231细胞48h后,其抑制率分别为61.91％和59.42％.结论 约氏不动杆菌G2菌株可有效催化葛根素合成葛根素糖苷;葛根素及其糖苷均能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖.
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肿瘤微环境影响乳腺癌耐药蛋白转录调控的研究进展
乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein， BCRP）是ABC转运蛋白超家族G亚家族重要成员之一。该基因（Gene ID：9429）于1998年由Doyle等[1]应用mRNA指纹技术在人乳腺癌细胞株MCF-7/AdrVp细胞中首次克隆，又名ABCG2蛋白。BCRP能够将进入乳腺癌细胞内的多种化疗药泵出细胞外，如5-FU、阿霉素、托泊替康、甲氨蝶呤、喜树碱及多柔比星等，从而使细胞产生耐药性，在乳腺癌多药耐药方面有着不可忽视的地位。因此，研究其转录调控机制对逆转乳腺癌的多药耐药，提高化疗疗效具有十分重要的意义。目前，对于BCRP的调控方面研究甚少。研究表明，BCRP启动子的两个调节因素缺氧和雌激素受体（estrogen receptor， ER）[2-3]在控制BCRP表达方面发挥作用；另外，BCRP的转录调控还受到肿瘤微环境及多种转录因子、细胞因子和生长因子等的共同协调。
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金雀黄素对人乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响
目的 研究金雀黄素对人乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响.方法 选用两种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231体外培养,VEGF免疫组化及原位杂交染色,并用图像分析仪进行定量分析.结果 两种人乳腺癌细胞均可转录VEGF-mRNA,并在细胞质中翻译合成相应的蛋白.经金雀黄素处理后两种细胞表达的VEGF都明显减少.结论 金雀黄素能通过下调VEGF-mRNA水平,减少VEGF的蛋白表达.
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大蒜素对人乳腺癌细胞株的抑制作用
目的 探讨大蒜素对人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)的抑制作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(5、10、20、40、80 mg/L)大蒜素对增殖MDA-MB-231的抑制率.通过药物半数抑制浓度(IC50)计算软件计算IC50.相差倒置显微镜下观察细胞形态的改变情况.结果 10、20、40 mg/L组大蒜素对MDA-MB-231的增殖有明显抑制作用(P＜0.01).24、48、72 h IC50值分别为16.50、8.28、7.82 mg/L.相差倒置显微镜下观察可见MDA-MB-231细胞分裂相减少,部分细胞漂浮,残存细胞形态不规则,状态差,反光差,出现细胞碎片.16.50、8.28、7.82 mg/L的大蒜素作用24、48、72 h后,琼脂糖凝胶电泳可见DNA凋亡梯形条带.结论 大蒜素可使MDA-MB-231的增殖受到抑制,促进肿瘤细胞凋亡, 具有抗肿瘤作用.
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植物雌激素对乳腺癌的抑制作用
目的 研究金雀黄素抑制人乳腺癌细胞株体外增殖作用及其作用机理.方法 选用两种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231体外培养,MTT法检测细胞增殖作用,Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,观察不同剂量的金雀黄素诱导细胞凋亡.同时采用免疫组化检测凋亡相关基因Bax和癌基因erbB-2蛋白的表达.结果 金雀黄素对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体外生长具有明显的抑制作用.Giemsa染色显示,金雀黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变,细胞固缩、发泡,染色质凝集呈块状,并沿核周分布.流式细胞仪检测在G1峰前可见凋亡峰,且随用药时间的延长,凋亡比率递增.而金雀黄素处理的MDA-MB-231细胞未见明显的凋亡形态改变和凋亡峰的出现,细胞周期明显地阻滞于G2～M期.蛋白水平检测表明金雀黄素促进MCF-7细胞Bax表达升高,抑制erbB-2蛋白的表达.结论 金雀黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于G2～M期,从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖,并主要是通过调节Bax和erbB-2蛋白的表达实现的,为其减缓人乳腺癌细胞的体内生长提供理论依据.
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硼替佐米和3-甲基腺嘌呤对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑瘤效应
蛋白质的降解对维持细胞正常功能至关重要,泛素-蛋白酶体和溶酶体自噬是细胞内蛋白质降解的两条主要通路[1,2].近年来,抑制肿瘤细胞蛋白酶体活性已成为一种新的化学治疗方法,一些化合物已被证实可以通过抑制蛋白酶体活性而诱导肿瘤细胞死亡[3,4].肿瘤自噬存在双重效应,一方面由于肿瘤组织的微环境乏氧且缺乏营养而有利于诱导肿瘤细胞自噬[5],另一方面,肿瘤细胞中又常常出现促自噬基因的失活性突变及抗自噬基因的活化[5,6],而不利于肿瘤细胞自噬.本研究观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和自噬的影响和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)抑制Bortezomib诱导自噬、增强Bortezomib抑制MCF-7细胞增殖的作用.
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二甲双胍对乳腺癌细胞株的抑制作用
本实验旨在观察二甲双胍对乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231的影响,探讨其抗肿瘤的作用及其机制.一、材料和方法1.人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231复苏,扩增.收集对数生长期的细胞,调整细胞浓度为5×105个/ml.共设4组:空白对照组、二甲双胍组、表阿霉素组、二甲双胍+表阿霉素组.每组设3孔,每孔(6孔板)加入细胞总数为5×105个,加入相应的药物及培养液.孵育48 h,计数.流式细胞仪检测.
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乳腺癌细胞表面共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达
本研究旨在探讨人乳腺癌细胞株与乳腺癌原代细胞表面共刺激分子的表达,以进一步明确乳腺癌细胞在癌变的过程中细胞表面分子的改变.
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补骨脂素对乳腺癌MCF-7细胞基因表达谱的影响
目的 观察中草药补骨脂分离提取的有效成分-补骨脂素对人乳腺癌MCF-7(ER阳性)细胞基因表达谱的影响.方法 用补骨脂素对人乳腺癌细胞株MCF-7(ER阳性)进行体外生长抑制实验,将经过补骨脂素作用的实验组细胞与对照组细胞株分别提取总RNA,用22K人类基因表达谱芯片检测基因表达情况,分析补骨脂素作用后MCF-7细胞出现的差异表达基因.结果 经补骨脂素作用的实验组细胞样本与对照组细胞样本比较,呈现差异表达的基因有1 053个(4.78%).其中表达上调的有456个(43.3%,Radio>2.0),表达下调的有657个(56.7%,Radio<0.5).差异表达明显的基因主要与细胞凋亡、细胞周期调控、核酸转译调节、转译因子活性、核苷酸转移酶活性、血管收缩调节等有关.结论 补骨脂素对人乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的分子机制是通过对细胞凋亡、细胞周期、核酸转译等多种基因的调控而起作用的.
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RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究
目的 研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4(p90 ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor associated factor 4,TRAF4)在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR法检测RSK4和TRAF4在HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况.用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达.结果 RSK4 mRNA、TRAF4mRNA在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞,RSK4 mRNA、TRAF4mRNA在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性(rRSK4=0.92,P＜ 0.01;rTRAF4=0.82,P＜0.01);ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100.在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4表现出负相关(r1=-0.81,P＜0.01);在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4同样呈现出高度负相关(r2=-0.84,P＜0.01).结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用.
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过表达RSK4m1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和侵袭的影响
目的 探讨过表达p90核糖体S6蛋白激酶4变异体1(ribosomal protein S6 kinase 4 variant 1,RSK4m1)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和侵袭的影响.方法 通过负载RSK4m1慢病毒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中稳定过表达RSK4m1.以MDA-MB-231亲本细胞为空白对照组(Con组)、转染空载病毒的MDA-MB-231细胞为阴性对照组(Mock组)、转染过表达RSK4m1的MDA-MB-231细胞为实验组(OE组).采用qRT-PCR和Westen Blot法检测各组RSK4m1mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 OE组中RSK4m1 mRNA及蛋白的表达量均明显高于Con组及Mock组(P＜0.05).CCK-8实验显示,24 h、48 h、72 h和96 h时OE组细胞增殖均低于Mock组和Con组(P＜0.05);细胞划痕实验显示,细胞培养24 h后,OE组细胞迁移率显著低于Con组和Mock组[(14.53±0.64)％ vs (25.67±2.44)％、(24.47±2.25)％,P＜0.05].Transwell小室侵袭实验显示,OE组细胞侵袭能力显著低于Con组和Mock组[(35.00±5.57)个vs(66.70±5.86)个、(58.67±4.16)个,P＜0.05].结论 过表达RSK4m1可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力,为RSK4m1可能成为乳腺癌的治疗新靶点提供了实验依据.
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肝素对透明质酸酶不同表达水平的人乳腺癌细胞侵袭力的影响
目的探讨透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)与肝素对肿瘤侵袭潜力的影响.方法通过体外实验测定肿瘤细胞穿透Matrigel(人工基底膜)的潜力.结果 6株表达不同水平Hyase的人乳腺癌细胞侵袭潜力存在明显差异,Hyase高表达细胞株(Hyase>0.1 mU/L)强于Hyase低表达细胞株(Hyase<0.1 mU/L)(P<0.05);肝素处理后,无论Hyase高表达或低表达细胞株的侵袭潜力均明显降低(P<0.05),其侵袭潜力与肝素存在量效关系.结论 Hyase与肿瘤侵袭潜力有关, 肝素能抑制肿瘤的侵袭.
