首页 > 文献资料
-
Period1、Period2对胶质瘤细胞的生物节律性调控作用
目的 研究大鼠胶质瘤细胞内生物钟基因Period1(Per1)、Per2 mRNA及蛋白的周期表达规律.方法 将体外培养的大鼠胶质瘤C6细胞接种于SD大鼠右侧尾状核区,在12 h光照和12h黑暗的标准昼夜节律环境下,采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测成瘤后4、8、12、16、20、24 h肿瘤组织中Per1、Per2 mRNA和蛋白的表达.结果 在大鼠胶质瘤组织中,Per1、Per2mRNA及蛋白产物呈节律性表达,其表达周期为12 h的超日节律.Per1 mRNA和蛋白的高表达时间点均位于4、16h,低表达时间点位于12、24 h;Per2 mRNA和蛋白的高表达时间点位于12、24h,低表达时间点位于8、20 h.结论 在SD大鼠体内,胶质瘤细胞的Per1、Per2基因呈12 h的超日节律表达,提示生物钟基因的表达异常与胶质瘤的发生发展具有相关性.
-
胃癌组织中节律基因 Period1和 Period2的表达变化及意义
目的：观察节律基因 Period1和 Period2在胃癌组织中的表达变化，并探讨其临床意义。方法选择138例胃癌患者，术中留取胃癌及癌旁组织，采用免疫组化法检测胃癌及癌旁组织中的 Period1和 Period2，实时荧光定量PCR 法检测胃癌及癌旁组织中的 Period1和 Period2 mRNA。结果胃癌组织中 Period1和 Period2阳性表达率分别为23．2％、31．2％，均低于癌旁组织中的44．9％、64．5％（P 均＜0．01）；胃癌组织中 Period1 mRNA 和 Period2 mRNA 相对表达量分别为1．05±0．10、1．09±0．12，均低于癌旁组织中的1．31±0．13、1．47±0．16（P 均＜0．01）；Period1 mRNA 表达与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和 Lauren 分型有关（P 均＜0．05），Period2 mRNA 表达与胃癌组织分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和 Lauren 分型均有关（P 均＜0．05）；相关性分析显示，胃癌组织中 Period1与Period2表达呈正相关（r ＝0．285，P ＜0．05），Period1 mRNA 与 Period2 mRNA 表达呈正相关（r ＝0．379，P ＜0．05）。结论胃癌组织中节律基因 Period1和 Period2呈低表达，可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。
-
生物钟基因调控胶质瘤C6细胞的生物节律性
有实验证实Rat-1和NIH3T3成纤维细胞在高浓度血清、某些化学物质的刺激下可以使Period1、Period2( Per1、Per2)基因产生稳定的类似于机体内的生物节律[1],使得体外通过细胞株开展生物节律研究成为可能.本研究旨在观察恶性胶质瘤细胞的节律性.
-
PER1与RACK1蛋白作用位点分析
目的 筛选人下丘脑视交叉上核(SCN)区域内与PERIOD1(PER1)相互作用的新蛋白,研究RACK1与PER1的作用特点,明确其结合的关键结构域.方法 采用酵母双杂交方法,筛选得到人SCN区域内与PER1-PAS结构域相互作用的新蛋白,并构建5种表达不同长度RACK1片段的酵母文库质粒与PER1诱饵质粒共转染酵母AH109进行杂交,通过营养缺陷筛选、报告基因检测获得阳性克隆,并采用体外转录、免疫共沉淀实验证实阳性克隆蛋白间的相互作用.结果 酵母双杂交筛选得到人SCN区域内表达RACK1蛋白的克隆,重组RACK1表达质粒与PER-PAS诱饵质粒进行酵母双杂交筛选后得到三个阳性克隆:RACK1(WD1-7)、RACK1(WD4-7)和RACK1 (WD5-7),β-半乳糖苷酶测试阳性证实报告基因表达,免疫共沉淀结果显示阳性克隆与PER1蛋白间存在相互作用.结论 RACK1与PER1存在直接相互作用,RACK1含有7个WD40结构域,本研究发现与PER1结合的小区域位于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ三个WD40结构域,提示其碳端序列为其结合的关键部位.
