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核黄素光化学作用灭活血液中淋巴细胞效果研究
目的 探讨核黄素联合可见光照射对诱导血液中淋巴细胞凋亡的效果.方法 利用流式细胞仪检测经核黄素光化学法处理的淋巴细胞的凋亡.结果 淋巴细胞凋亡数量明显增加.结论 核黄素联合可见光照射可有效诱导淋巴细胞凋亡,凋亡是淋巴细胞减少的主要原因.
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核黄素光化学方法抑制淋巴细胞增殖及细胞因子分泌活性的实验研究
目的 研究核黄素光化学方法对淋巴细胞的增殖活性及细胞因子分泌活性的抑制程度,观察该方法对淋巴细胞增殖周期的影响.方法 实验分为实验组:随机选择捐献的全血将从中收集的淋巴细胞悬浮于核黄素终浓度为50μmol/L的1640缓冲溶液中,注入PVC透光转移袋内(440nm处透光率为80%),用400-500nm的可见光照射,照射量为8.8J/ml;对照组:为相同来源、悬浮于不含核黄素的1640缓冲溶液中、未接受光照处理的淋巴细胞.以植物血凝素同步刺激2个组的淋巴细胞,用MTS非放射性细胞增殖试验检测淋巴细胞的增殖活性,计算核黄素光化学处理对淋巴细胞的增殖抑制率;用酶标方法检测细胞因子;用流式细胞术观察经植物血凝素(PHA)刺激后的淋巴细胞周期变化(RPT-lymphocytes).结果 与对照组比较,实验组经过核黄素光化学法处理后的淋巴细胞(RPT-lymphocytes)对PHA刺激的增殖抑制率为(99.21±1.06)%,淋巴细胞IL-1β、-2、-6、-8及TNF-α、IFN-γ细胞因子的分泌量比对照组细胞分别降低了(95.09±2.60)%、(98.20±1.64)%、(98.77±0.97)%、(92.30±11.04)%及(98.82±1.42)% 、100%;实验组S期细胞占0.73%,对照组S期细胞则占32.5%.结论 可见光激发的核黄素光化学方法可有效抑制淋巴细胞的增殖活性和细胞因子分泌活性,阻止淋巴细胞进入细胞增殖周期,提示该方法可能是预防TA-GVHD的一种有效并且可行的方法.
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核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞灭活作用的研究
目的 研究核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞的增殖及细胞因子分泌活性的抑制作用,探讨该方法对淋巴细胞凋亡的诱导作用.方法 实验分为实验组:从随机采集的全血中分离淋巴细胞,将其悬浮于核黄素终浓度为100 μM的自体血浆中,注入PVC袋,在波长为420 nm的可见光下照射,总照射剂量为40 J/cm2；对照组:使用相同来源的淋巴细胞,悬浮于不合核黄素的自体血浆中,不进行光照处理.用植物凝集素(PHA)同步刺激两组淋巴细胞,用BrdU细胞增殖检测试剂盒检测淋巴细胞的增殖活性,并计算核黄素光化学法对淋巴细胞的增殖抑制率；用酶联免疫试剂盒检测淋巴细胞细胞因子的分泌量；使用Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒和流式细胞技术检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,经过核黄素光化学法处理的实验组淋巴细胞对PHA刺激的增殖抑制率为(94.69±7.61)％；实验组淋巴细胞接受PHA刺激后,细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌量与对照组比较分别降低了(89.54±22.75)％、(77.83±22.3)％和(88.57±15)％,IL-4的分泌量较对照组差异不明显；流式细胞术检测结果表明,实验组绝大多数淋巴细胞发生了凋亡,其早期凋亡率和晚期凋亡或坏死率均明显高于对照组.结论 核黄素光化学法能够抑制人外周血淋巴细胞的增殖和一些细胞因子的分泌,同对可诱导淋巴细胞凋亡.该方法有望成为预防TAGvHD的新途径.
