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探讨RhD阴性确认试验预测胎母输血综合征的临床应用
目的 探讨RhD阴性确认试验预测胎母输血综合征(FMH)的临床应用,为Rh阴性孕妇预测胎母输血寻找简便、快速、可靠的诊断方法.方法 运用微柱凝胶免疫技术对56例Rh阴性待产妇进行RhD阴性确认试验,对确认试验阳性标本为验证其实验结果的准确性,通过运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)进行RHD基因分型.结果 56例Rh阴性待产妇中3例RhD阴性确认试验阳性,阳性率为5.36％,3例阳性标本基因型分析结果证实其中1例整个RHD基因缺失、1例包含2种不同的RHD等位基因(一条为RHD (1-2)-CE (3-6)-D (7-10),另一条为RHD1227A)、1例标本DNA提取失败.结论 RhD阴性孕妇(除弱D表现型)近期若无输血史,由于胎儿Rh(D)阳性红细胞进入母体即发生了胎儿-母体间的输血,导致RhD阴性确认试验的阳性结果,此试验可作为围产期预测胎母输血综合征的监测指标,据此推测产妇孕前常规进行E、C、c、e Rh抗原鉴定.
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1条突变型RHCE* ce新等位基因的发现
目的 采用新型Rh血型系统的多重连接依赖式探针扩增(MLPA)检测试剂盒,对广州地区收集的200例RhD阴性献血者进行RHCE基因分型.方法 收集RhD阴性献血者200例,从静脉血提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒进行RHCE基因分型和拷贝数定量分析.对MLPA显示的RHCE拷贝数异常的样本,进行RHCE基因外显子1至10测序分析.对发现的杂合突变进行克隆测序.结果 在200例RhD阴性献血者中,MLPA基因分型结果显示有6例标本RHCE等位基因定量拷贝数下降,测序发现RHCE基因外显子2的一个新杂合突变(c.308C＞T,p.103Pro＞ Leu),克隆测序证实了该突变.结论 在中国人群中,首次发现了一条新的突变型RHCE* ce(308C＞ T)等位基因,该等位基因在广州地区RhD阴性献血者中频率为6/400.
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多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术在广州地区RhD阴性献血者基因分型研究中的应用
目的 采用新型Rh血型系统的MLPA检测试剂盒,对广州地区收集的200名RhD阴性献血者进行基因分型.方法 采用传统的血型血清学方法,对RhD阴性献血者进行RhD表型鉴定.提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的200名RhD阴性献血者进行RHD基因分型.对于不能明确分型的标本,进行RHD基因直接测序分析.结果 在200名RhD阴性献血者中,采用MLPA方法对196名进行了明确的基因分型.其中,127名为RHD基因缺失(占63.5％)；仅检测到包含RHD1227A突变的DEL等位基因有41例,其中38例包含杂合等位基因,其余3例包含纯合等位基因；仅检测到RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10)等位基因的有23例,其中19例杂合,4例纯合；3例包含2种不同的RHD等位基因(1条为RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10),另1条为RHD1227A)；其余2例分别包含杂合的DFR-2(RHD-CE(4) -D)及弱D15型(RHD845A)等位基因.在其余4例直接测序分析的标本中,2例包含杂合的RHD711 delC突变；1例1条等位基因为MLPA检测到的包含RHD1227A突变的DEL等位基因,另1条为包含711delC突变的RHD等位基因；其余1例的1条等位基因为MLPA检测到的RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10),另1条为包含新突变的RHD等位基因(1154G ＞T,385Gly＞ Val).结论 MLPA检测试剂盒是适用于中国人群的1种快速、有效的高通量基因分型方法,能够对中国人群常见的各种RHD基因型进行明确分型,适用于参比实验室相关疑难标本的基因分型检测.也可应用于中国人群常见的Del表型检测,使Del表型患者不必再输注RhD阴性血液,节约稀有的RhD阴性血液资源.
