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1-磷酸鞘氨醇后适应对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的：研究1-磷酸鞘氨醇( S1P)后适应对人脐静脉内皮细胞( HUVEC)缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法建立HUVEC缺氧/复氧损伤模型,将HUVEC细胞分为5组,正常对照组、S1 P低剂量组、S1 P中剂量组、S1P高剂量组以及缺氧/复氧损伤(H/R)组。 MTT法检测细胞存活率；流式细胞术分析测定细胞凋亡率；比色法测定细胞培养液中总超氧化物歧化酶( total superoxide dismutase,T-SOD)、铜锌超氧化物歧化酶( copper/zinc superoxide dis-mutase,CuZn-SOD)和锰超氧化物歧化酶( manganese superox-ide dismutase, Mn-SOD )活力以及一氧化氮( nitric oxide, NO)、丙二醛( malondialdehyde,MDA)含量；荧光显微镜下观察线粒体膜电位；Western blot测定HUVECs细胞Bcl-2/Bax、eNOS蛋白的表达水平。结果与H/R组相比,S1P低、中、高剂量组可明显增加HUVECs细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率；均明显升高 T-SOD活力、CuZn-SOD活力、Mn-SOD活力,降低MDA含量,明显升高NO含量及增加eNOS蛋白表达,降低凋亡率,抑制线粒体膜电位下降。结论 S1 P能够使H/R损伤的HUVECs细胞凋亡率降低,且呈一定的浓度依赖性。 S1P对H/R损伤的HUVECs细胞凋亡的保护作用可能与降低细胞内MDA含量,提高细胞内SOD活力,提升线粒体膜电位,增强抗凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表达有关。
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丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对内皮细胞的氧化损伤及凋亡的影响
目的:观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人脐静脉内皮细胞氧化损伤所致凋亡的保护作用机制研究.方法:不同浓度的丹参酮IIA预处理细胞24 h再给与4×10-4 mol/L H2O2处理3h.CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测凋亡,ROS和线粒体膜电位值;高内涵筛选技术检测AIF;Cell Death Detection ELISA试剂盒检测DNA fragment.结果:丹参酮ⅡA(5、10、20×106mol/L)可以浓度依赖性的抑制H2O2诱导的内皮细胞损伤,TanⅡA抑制H2O2引起的细胞凋亡降低被升高的ROS值,升高H2O2抑制的线粒体膜电位.同时可以抑制H2O2诱导的AIF的核转移并且H2O2引起的DNA fragment具有减轻作用.结论:丹参酮ⅡA可以减轻H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤及凋亡,并且主要是通过抑制AIF核内转移实现的.
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黄芪多糖对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护作用
目的:观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞HUVECs损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法:不同浓度的黄芪多糖孵育内皮细胞1h后加入400μmol/L的H2O2继续培养24h,用MTT法检测细胞活性;DAPI/PI双染法观察细胞形态并统计细胞凋亡率;硝酸还原酶法测定NO释放量;Western blot法测定Cu/Zn-SOD蛋白表达.结果:H2O2模型组细胞活性较之空白对照组下降42.87％,细胞核皱缩形态不规则化,细胞凋亡率升高了7倍、NO释放量降低42.96％ ,Cu/Zn-SOD蛋白表达下降45.31％;与模型组相比黄芪多糖各剂量组可不同程度改善这些变化,其中黄芪多糖1μg/ml组作用为明显,其细胞活性和NO释放量分别增加24.96％、32.13％,细胞凋亡率降低36.02％,Cu/Zn-SOD蛋白表达升高37.14％.结论:黄芪多糖可能通过影响内皮细胞NO释放量和Cu/Zn-SOD蛋白表达,改善细胞NO与氧自由基的平衡发挥保护作用.
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三七总皂苷对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究
目的:观察三七总皂苷(PNS)对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs) LDH释放量、胞内SOD活性的影响,研究其对受损细胞粘附分子ICAM-1及MCP-1 mRNA表达的影响,探讨三七总皂苷对HUVECs的保护作用及其在动脉粥样硬化中作用的可能机制.方法:三七总皂苷预孵育细胞4h后,加入300μ mol/L H2O2,继续培养24h,MTT法检测细胞活力,采用试剂盒测定LDH释放量、SOD酶活力,荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测三七总皂苷作用下内皮细胞ICAM-1及MCP-1 mRNA的表达.结果:三七总皂苷在25～ 100μg/ml浓度范围内可显著提高受损细胞活力,并能显著降低LDH漏出率,提高胞内SOD酶活力;RT-PCR结果表明H2 O2组内皮细胞表达的ICAM-1和MCP-1 mRNA明显高于正常细胞组,而同时加入50及100μg/ml的三七总皂苷后两者mRNA表达明显下降.结论:三七总皂苷可保护血管内皮细胞免受H2O2的损害,改善受损细胞氧化指标,降低参与动脉粥样硬化相关细胞因子表达,从而预防和治疗动脉粥样硬化.
