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TaqMan 实时定量 PCR文献资料
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Real-time PCR法用于日本血吸虫感染宿主血清DNA的定量检测及其感染度的评价
目的 以日本血吸虫高度重复序列-逆转录转座子SjR2为靶序列,建立TaqMan实时定量PCR法检测宿主血清中的日本血吸虫DNA用于评价感染度.方法 以real-time PCR法检测不同感染度的家兔模型血清DNA.结果该法具有高度的敏感性和特异性,可以检测到44.7拷贝的重组质粒DNA.在感染家兔后的3 d到7周血清中均能检测到血吸虫DNA,不同感染度早期检测的时间节点及其检测阈值分别为,家兔感染30条尾蚴(EPG=14)需在感染后2周才能检测到目的 DNA,其含量为119.03拷贝,感染50条尾蚴(EPG=24)、感染100条尾蚴(EPG=48)则在感染后1周可检测到目的 DNA,其含量分别为54.36拷贝和72.24拷贝,在家兔感染200条尾蚴(EPG=97)、感染500条尾蚴(EPG=232)早在感染后3 d即可检测到目的 DNA,其含量分别为60.34拷贝和142.47拷贝.日本血吸虫感染宿主血清DNA水平与感染度呈正相关,即血清DNA浓度随感染度的增大而上升.结论 本研究所建立的real-time PCR法可定量检测血清DNA动态变化并对日本血吸虫病诊断及感染度的评价具有潜在的应用价值,为日本血吸虫病诊断与疗效考核提供了新方法.
关键词： 日本血吸虫 TaqMan 实时定量 PCR 血清DNA 感染度 检测阈值
