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长链非编码RNA MYU对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨长链非编码RNA MYU对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其机制.方法 检测长链非编码RNA MYU在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达差异,将Hela细胞株分为:1组:转染对照NC序列;2组:转染MYU siRNA;3组:转染对照pcDNA3.1;4组:转染pcDNA3.1-MYU过表达序列.采用CCK-8法检测各组细胞细胞增殖活力,Western blotting和RT-PCR检测c-myc、CDK4、CDK6基因mRNA及蛋白的表达,采用RNA结合蛋白免疫沉淀试验验证WDR5与MYU的结合,染色质免疫沉淀试验检测组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)水平.结果 癌组织LncRNA MYU的表达量高于癌旁组织(P<0.05);转染24、48 h,OD值比较,2组低于1组,4组高于3组,P均<0.05;Ki-67阳性细胞所占百分比比较,1组高于2组,3组低于4组,P均<0.05;c-myc、CDK4、CDK6 mRNA及蛋白比较,1组高于2组,3组低于4组,P均<0.05;LncRNA MYU与WDR5的富集量高于阴性对照(P<0.05);H3K4me3水平比较,1组低于2组,3组高于4组,P均<0.05.结论 长链非编码RNA MYU通过募集WDR5抑制c-myc基因启动子区H3K4me3,上调c-myc转录从而促进Hela细胞增殖.
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Wdr5通过Wnt通路促进肝癌细胞增殖
目的 研究Wdr5对肝癌细胞增殖的影响及其可能的机制.方法 构建Wdr5的shRNA病毒感染肝癌细胞系Huh7和HepG2下调Wdr5的表达,进而通过克隆形成实验和MTT等方法检测下调Wdr5表达后对细胞增殖的影响.结果 下调Wdr5后,肝癌细胞系Huh7和HepG2的克隆形成、细胞增殖能力显著降低,Wnt通路关键基因APC和β-catenin显著降低.结论 下调Wdr5能抑制肝癌细胞增殖,这一过程可能是通过Wnt通路进行的.
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WDR5真核表达载体的构建及其在LNCaP细胞中的稳定表达
目的 构建人源WDR5全长结构基因真核表达载体,建立稳定表达WDR5的LNCaP细胞株.方法 PCR扩增WDR5基因,将WDR5插入pCI-neo载体中,酶切及测序鉴定重组质粒.利用脂质体转染法将重组质粒转染LNCaP细胞,Real Time-PCR检测转染细胞WDR5的mRNA表达水平.结果 经酶切及测序证实真核表达载体pCI-neo-WDR5构建正确.重组质粒转染到LNCaP细胞后,用G418筛选获得稳定表达的细胞株,Real Time-PCR方法检测到WDR5基因在转录水平的表达.结论 PCI-neo-WDR5成功转染LNCaP细胞株中并稳定表达,为下一步WDR5的深入研究及应用奠定了基础.
