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一种改良的大鼠脊髓半横断模型制备
为了更好地观察和治疗脊髓损伤,制备动物损伤模型非常必要.目前多用Ramberg[1]和Borgens[2]建立的大鼠半横断脊髓损伤模型,本研究主要进一步改进脊髓半横断损伤模型,克服缺点,使其操作简单、实用,从而提高实验效率.
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脊髓半横断猕猴的护理
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是脊柱骨折的严重并发症.有效的动物模型是脊髓损伤修复研究的基础.以往的研究都是建立在啮齿类动物上的,而人类神经系统生理结构及修复能力与啮齿类动物有很大不同.建立猴脊髓半横断(hemi-sected SCI,hSCI)和全横断(transected SCI,tSCI)脊髓损伤模型,更深入地研究脊髓损伤修复机理,为临床提供治疗脊髓损伤提供新的策略.动物模型建立之后,正确的护理是实验成功的必要环节,常常决定了实验的成败.为提高非人灵长类动物在脊髓损伤与修复研究中的成活率,本文对实践中猴脊髓半横断损伤模型有效的护理经验进行了总结.
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骨髓基质细胞移植联合应用脑源性神经营养因子促进大鼠脊髓损伤修复
1 材料与方法取Wistar大鼠(鼠龄2～4个月)股骨和胫骨骨髓组织, 采用Percoll分离液(比重1.077)分离法获取骨髓基质细胞(BMSCs)进行培养纯化.细胞传3代,移植前72 h按20 μmol/L终浓度加入5溴-2脱氧尿嘧啶(BrdU)标记细胞核.采用大鼠T12,13脊髓半横断损伤模型.选择Wistar大鼠48只,体重250～300 g,雌雄不拘.随机分成Ⅰ组:脊髓半横断后明胶内给予DMEM 10 μl;Ⅱ组:明胶内给予脑源性神经营养因子(BDNF)10 μl(33 μg/ml);Ⅲ组:明胶内给予BMSCs悬液8 μl,损伤上下各1 mm处用无损伤玻璃针头 (尖端50 μm)移植 BMSCs悬液共2 μl(多点注射 ,每点0.5 μl);Ⅳ组:明胶内给予BMSCs+BDNF.每组12只大鼠.
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pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤 c-fos、bcl-2基因表达的影响
创伤性脑损伤的分子生物学研究机制已深入到基因水平，但在分子水平上对脊髓损伤（SCI）的探讨尚少。笔者旨在检测pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞(SC)移植对SCI后早期局部脊髓组织神经细胞中c-fos基因及bcl-2基因表达的影响，并初步探讨其意义。 一、材料与方法 健康SD大鼠80只，体重250～300g，雌雄不拘（由华西医科大学动物中心提供）。随机分为4组，pSVPoMcat微基因（在华西医科大学基础医学院重组DNA研究室构建）修饰的SC组为A组，SC组为B组，损伤组为C组，正常对照组为D组。用质量浓度为5 g/L的戊巴比妥钠麻醉动物后，采用笔者等［1，2］的方法，制备T8平面成鼠半横断损伤模型后将pSVPoMcat微基因修饰的SC、SC及明胶海绵分别移植入A、B、C组。移植术后8 h（SCI继发损害的高峰在伤后6～8 h)［3］，迅速取伤段脊髓，D组取相对应（T8）脊髓。将上述标本随机分为甲、乙两组，每组分别含A、B、C、D各10只。用酸性异硫氨氰酸胍-酚-氯方法提取上述脊髓组织中的RNA。然后用地高辛标记探针进行斑点杂交，标记及检测试剂盒为Bohringer Manheim公司产品，c-fos探针和bcl-2探针分别购于北京华美公司及美国Sigma公司。
