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PFOS对哈维氏弧菌生长及外毒素基因的影响
探讨了全氟辛烷磺酸盐(PROS)对哈维氏弧菌密度及外毒素基因表达的影响.用含有不同浓度PFOS(5、50、500 mmol/L)的培养基培养哈维氏弧菌,分别在6、15、24 h取适量菌液,经4 000 r/min离心,磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次,制成PBS菌悬液.采用实时荧光定量PCR检测其胞外蛋白酶、溶血素及保守序列16 SrRNA基因在不同培养时间的拷贝数.结果表明,仅5mmol/L PFOS对细菌生长有明显的抑制作用(P＜0.01),其它两浓度均无明显影响.3个浓度的PFOS都使胞外蛋白酶和溶血素基因的拷贝数有明显增加(P＜0.01),而16 SrRNA的基因拷贝数仅受低浓度的5 mmol/L PFOS影响而有所增加(P＜0.01).同时,溶血素基因与16 SrRNA类似,对低浓度PFOS更为易感.提示PFOS对哈维氏弧菌的生长及基因有一定影响,尤以低浓度PFOS为甚.
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聚乙二醇对哈维氏弧菌疫苗免疫效果的影响
以聚乙二醇( PEG)作为超声介质及疫苗载体,用超声波瞬间高温、高压及剪切力作为灭活方式,将哈维氏弧菌制成PEG结合疫苗,该疫苗与传统疫苗分别经腹腔注射免疫接种锦鲤成鱼,检测了锦鲤血细胞吞噬百分率、吞噬指数、抗菌活力、抗体效价及免疫保护力等指标,评价疫苗效果.结果表明,PEG6000作为载体制备的疫苗,其各指标统计比较或绝对值均高于其它实验组；PEG6000疫苗免疫保护力相比也高,达到89.5％,高于传统灭活疫苗31.6％,作为载体制备的疫苗效果好.
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广藿香对耐药哈维氏弧菌生物膜形成及相关基因的影响研究
目的 研究广藿香对耐药哈维氏弧菌生物膜形成的抑制作用及其对成膜相关基因表达的影响等,尝试从分子水平阐释其抑制菌膜形成的机理.方法 以耐药哈维氏弧菌X140701为实验菌株,通过二倍稀释法测定广藿香对菌株的低抑菌浓度(MIC);采用结晶紫染色法测定生物膜形成量;采用qRT-PCR检测广藿香对生物膜相关基因表达的影响.结果 广藿香对X140701 MIC为31.25 mg/mL(以生药计).0.782 mg/mL广藿香水提物对X140701生物膜抑制率达37.6％;广藿香水提物可使X140701生物膜相关基因lux R、fla B基因表达量上调,lux S、hfq、omp W基因表达量下调.结论 广藿香能有效抑制耐药哈维氏弧菌生物膜的形成,其抑制作用与5个成膜相关基因中的表达密切相关.
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抗哈维氏弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定
目的:研制抗哈维氏弧菌特异性单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:以哈维氏弧菌GYC1108-1颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与Sp2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb特异性及敏感性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后,共获得5株抗GYC1108-1的mAb,其中1B7的细胞上清及腹水效价分别为1:3 200和1:32 000,交叉反应结果表明1B7除了与测试的多株哈维氏弧菌发生反应外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌等发生交叉反应.ELISA检测1B7腹水对GYC1108-1的敏感性达107/L.结论:制备的抗哈维氏弧菌mAb可为哈维氏弧菌的检测及防治等提供有用的试剂.
