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肇庆地区血小板供者库的建立及应用
目的 建立肇庆地区已知人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因分型及人类血小板抗原(human platelet alloantigen,HPA)HPA-1~6、9、15基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(platelet transfusion refractory,PTR)患者提供HLA及HPA相合的血小板.方法 采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific olignuliotide probe,PCR-SSO)检测血小板供者的HLA基因分型及聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测HPA-1~6、9、15基因型.对杂合度高的HPA-3、15随机抽样20个标本进行测序.对3例患者进行HLA-I分型.结果 成功检测出101名无偿血小板捐献者HLA及HPA-1~6、9、15基因型;HPA-3、15的测序结果与PCR-SSP一致.HLA-A位点等位基因共检出11个;HLA-B位点共检出等位基因20个.3例患者中的1例从已知的HLA血小板库中找到完全一致供者,另外2例也找到三位点吻合的血小板供者.结论 建立基于HLA-I类抗原及HPA基因分型的血小板供者资料库,有助于给PTR患者提供HLA和HPA相合的单采血小板.
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新乡地区HPA基因分型供者库在免疫性血小板输注无效中的应用研究
目的 建立新乡地区已知HPA-1-18基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(PRT)患者提供HPA相合的血小板,方法 建立PCR-SSP检测HPA-1-18基因型检测方法;采用固相凝集法对52名PRT患者,做血小板同种抗体筛查;应用HLA抗体特异性试剂盒检测患者血清群体反应性抗体;对血小板同种抗体筛查阳性患者,采用已知HPA基因型的标准谱血小板傲抗体鉴定,并对其进行HPA基因分型;采取HPA抗体无对应抗原的供者血小板进行输注.结果 成功检测出150名无偿血小板捐献者HPA-1-18基因型.在52例PRT病例中,检出血小板同种抗体23例(阳性率44％),其中5例鉴定为抗-HPA (21.7％),分别为HPA-3a 2例;HPA-15b 3例;其余HLA抗体阳性18例.结论 对PRT患者采用HPA基因型相合的方法进行输注取得临床效果.
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多重PCR-SSP技术应用于HPA-1～17bw基因分型研究和广西壮族人群HPA多态性的分布
目的 建立应用于HPA-1～ 17bw基因分型的多重聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对广西壮族人群HPA多态性分布进行调查.方法 设计多种HPA序列特异性引物的组合,在1个PCR反应体系中同时扩增多个HPA基因,根据扩增片断的有无和大小,指定相应的HPA基因型,并以17例国际合作研究项目提供的HPA参比DNA配组标本,以及100例已知HPA型的血小板供者的DNA标本作验证.使用验证后的技术对2659名无血缘关系的广西壮族人群展开PA-1～17bw的基因分型和抗原多态性研究.结果 建立了由16种PCR引物混合液,其中有6种多重PCR引物混合液组成的PCR-SSP反应体系,可用于HPA-1～17bw等位基因的检测.以HPA参比DNA配组标本,以及已知HPA型的供者的DNA标本的检测作验证,HPA分型结果完全一致;在2 659名广西壮族人群中各HPA等位基因频率分布为:HPA-1a和-1b为0.991 5和0.008 5,HPA-2a和-2b为0.956 9和0.043 1,HPA-3a和-3b为0.512 2和0.487 8,HPA-5a和-5b为0.985 0和0.015 0,HPA-6a和-6b为0.985 1和0.014 9,HPA-15a和-15b为0.5256和0.474 4;HPA-4、HPA-7～14bw、HPA-16～ 17bw只有a/a的纯合子;HPA-2～3、HPA-6bw以及HPA-15均存在a/a和b/b纯合子基因型个体.结论 多重PCR-SSP技术应用于HPA基因分型减少了PCR扩增反应数量,节省了人力、物力,HPA分型系统性强,可用于大量标本的HPA-1～ 17bw基因分型等研究和筛查工作;应用该方法研究证明广西壮族人群HPA多态性分布具有民族特征,有助于对壮族人群血小板免疫学特点的了解.
关键词： 人类血小板特异性抗原(HPA) HPA基因分型 多重PCR-SSP 壮族 广西
