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ASIC1a参与小鼠小脑普肯耶细胞发育的机制研究
目的 探讨ASIC1a参与小脑普肯耶细胞发育的机制. 方法 取C57BL/6初生小鼠,通过体外培养得到小脑普肯耶细胞.将原代小脑普肯耶细胞分为实验组和对照组,分别在细胞发育早期阶段及晚期阶段处理,其中实验组用shRNA-ASIC1a序列重组质粒慢病毒感染以下调ASIC1a表达,对照组用shRNA-对照序列重组质粒慢病毒感染.采用免疫荧光染色观察早期阶段和晚期阶段实验组、对照组小脑普肯耶细胞的形态学结构并计数树突分支;采用Westem blotting检测小脑普肯耶细胞中钙结合蛋白D-28K、胶质纤维酸性蛋白、Zic、小清蛋白以及N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)的表达;采用RT-PCR检测小脑普肯耶细胞中内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的表达. 结果 免疫荧光染色检测发现:在早期阶段和晚期阶段,实验组、对照组小脑普肯耶细胞形态学差异明显,对照组小脑普肯耶细胞的树突生长发育较实验组好;实验组小脑普肯耶细胞的二、三级树突分支数目较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting检测发现:在早期阶段,只有普肯野细胞特异性蛋白钙结合蛋白D-28K表达在实验组中较对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).在早期阶段和晚期阶段,ASIC1a表达下调后,实验组NMDAR表达较对照组明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测结果发现:在早期阶段和晚期阶段,实验组内质网应激相关因子CHOP、PERK表达均较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 ASIC1a在小脑普肯耶细胞发育机制中发挥着重要作用.
关键词： 普肯耶细胞 酸敏感离子通道1a 内质网应激 N-甲基-D-天冬氨酸受体 -
显示小脑普肯耶细胞的染色法
①目的探讨显示小脑普肯耶细胞形态结构的染色方法.②方法 Golgi镀银法显示普肯耶细胞,并与常规的苏木精-伊红染色法相比较.③结果采用Golgi镀银制片法,能够显示出小脑普肯耶细胞的胞体、树突、轴突及树突棘的特殊形态结构,普肯耶细胞呈扇形,其形态结构十分典型,清晰可见.而常规的苏木精-伊红染色只能显示普肯耶细胞的胞体.④结论 Golgi镀银法是显示小脑普肯耶细胞形态结构的理想染色方法.
