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瑞替加滨对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用及机制研究
目的 探讨瑞替加滨(M型钾离子通道开放剂)对急性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用及其可能机制. 方法 将70只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组(n=10)、大脑中动脉闭塞(MCAO)组(n=10)和干预组(n=50),再按照给予药物和给药时间的不同将干预组分为XE991(M型钾离子通道阻滞剂)组、瑞替加滨0h组、瑞替加滨lh组、瑞替加滨3h组及瑞替加滨6h组,每组10只.MCAO组和干预组采用线栓法制作小鼠MCAO模型,于脑缺血90 min后再灌注.干预组相应给予瑞替加滨(10.5 mg/kg)及XE991 (3.0 mg/kg),假手术组和MCAO组给予等量生理盐水.造模后24 h,采用TTC染色检测各组脑梗死体积,采用HE染色观察海马CA1区神经元形态变化,采用Western blotting检测缺血半影区细胞膜蛋白CD40L表达量,采用TUNEL法计数海马区凋亡神经元. 结果 假手术组未发现脑梗死病灶,海马神经元形态无明显改变,无CD40L蛋白表达,TUNEL阳性细胞数少见.(1)TTC染色结果:MCAO组和干预组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,但瑞替加滨0h组、瑞替加滨1h组、瑞替加滨3h组及瑞替加滨6h组脑梗死体积均较MCAO组明显缩小,XE991组脑梗死体积较MCAO组明显增大,差异均有统计学意义(P＜0.05);瑞替加滨6h组较瑞替加滨0h、瑞替加滨1h和瑞替加滨3h组脑梗死体积增大,但差异无统计学意义(P＞.05).(2)HE染色结果:MCAO组及XE991组海马区脑组织肿胀与坏死明显,瑞替加滨0h组、瑞替加滨lh组、瑞替加滨3h组及瑞替加滨6h组神经元坏死病理损害明显较轻.(3)Western blotting检测结果:瑞替加滨0h组、瑞替加滨3h组缺血半影区CD40L相对表达量均较MACO组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)TUNEL法结果:瑞替加滨0h组、瑞替加滨1h组及瑞替加滨3h组TUNEL阳性细胞数较MCAO组明显减少,XE991组较MCAO组明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 瑞替加滨对急性脑缺血再灌注损伤有脑保护作用,其机制可能是降低神经元的兴奋性,减轻缺血半影区的炎症反应,从而抑制细胞凋亡.同时这种脑保护作用具有时间依赖性,即超过一定的时间窗,脑保护作用会减弱.
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M型钾离子通道开放剂对脑梗死再灌注损伤的保护作用
目的 探讨M型钾离子通道开放剂对缺血性脑卒中的脑保护作用及其可能机制.方法 选取C57BL/6J小鼠60只,采用抽签法随机分为假手术组(10只,Sham组)、对照组(10只,MCAO组)、治疗组(40只,RTG组),按照给药时间的不同再将RTG组分为RTG 0 h、RTG 1 h、RTG3h、RTG6h四个亚组,每组10只.采用线栓法制作小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于脑缺血2h后再灌注.RTG组给予瑞替加滨(10.5 mg/kg),假手术组和缺血再灌注组给予等量生理盐水.采用TTC染色法检测脑梗死体积;Longa评分法进行神经功能评分;苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态变化;免疫组化法和Western blotting法测定小鼠缺血半影区半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和细胞膜蛋白CD40L的表达水平.结果 假手术组未发现脑梗死病灶,海马神经元无明显改变,Caspase-3阳性细胞数少见,无CD40L表达.MCAO组和RTG组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,但RTG四个治疗组梗死灶均较MCAO组明显缩小(P＜0.05),RTG6h组较RTG 0 h、RTG1h、RTG 3 h给药组小鼠脑梗死体积增大,但差异无统计学意义(P＞0.05).RTG各组较MCAO组神经功能明显改善.MCAO组海马区脑组织肿胀与坏死明显,RTG各治疗组脑水肿和神经元坏死病理损害明显较轻.RTG组Caspase3阳性细胞数较MCAO组明显减少(P＜0.05),0、1、3h治疗组为显著.RTG0h、RTG 1h及RTG 3h组梗死周围区CD40L含量均较MCAO组明显下降(P＜0.05),RTG6h下降不明显(P＞0.05).结论 M型钾离子通道开放剂瑞替加滨对缺血性脑卒中具有脑保护作用,其机制可能是降低神经细胞的兴奋性,减轻缺血半影区的炎症反应,从而抑制细胞凋亡.M型钾离子通道开放剂的脑保护作用具有时间依赖性,即超过一定的时间窗脑保护作用会减弱.
